土壤脂肪酶(S-LPS)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格: 100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/915b4ba5-8a66-4c40-a353-db69185d9869.jpg)
溶液的配制:
1、 标准品:临用前加入 1.97 mL 甲苯,即 100 μmol/mL 油酸。用前注意解冻溶解。用不完的试剂可以 2-8℃保存一个月。
2、 工作液的配制:将试剂三临用前加入 16 mL 蒸馏水于沸水浴中溶解,2-8℃保存两周。冷却至常温后加入
4 mL 试剂二混合,高速震荡 2 次,每次 3min,间隔 5min。可根据该比例现用现配。
产品说明:
脂肪酶(LPS)又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。该酶在土壤生物动力学中具有重要的作用。
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/593660f8-78a2-46cb-9f1b-0910c9b5b808.jpg)
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔UV板(非聚苯乙烯材质)、台式离心机、震荡混匀器、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯(不可快递)、冰和蒸馏水、30-50目筛。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干,过30-50目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至710nm,分光光度计用甲苯调零。
2、 标准溶液的稀释:取50μL 100μmol/mL油酸标准溶液,加入950μL甲苯,充分混匀,配制成5μmol/mL标准溶液待测,现用现配。(实验中每管需要300μL,为减小实验误差,故配制大体积。)
3、 操作表:取1.5mL EP管,加入下列试剂
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/fadb904d-8918-47bb-a819-6824ebc4a02d.jpg)
三、S-LPS 活性计算
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/68f1ccca-d67f-4dbc-b230-0cccce5cc232.jpg)
注意事项:
1、甲苯有毒,实验过程中需佩戴手套和口罩。
2、实验过程中须远离火源。
3、当吸光度大于 0.8 时,建议将样本稀释后测量(第二次加入甲苯的量增加)。
4、甲苯可溶解聚苯乙烯/聚丙烯材质。
实验实例:
1、 取两管 0.03g 三叶草土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用 96 孔 UV 板测定吸光值,记为 A 测定管、A 对照管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.145-0.093=0.052,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.432-0.061=0.371,计算酶活得:S-LPS (U/g 土样) =43.2×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=43.2×0.052÷0.371÷0.03=201.83 U/g 土样。
2、 取两管 0.03g 林土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用 96 孔 UV 板测定吸光值,记为 A 测定管、A 对照管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.124-0.08=0.044,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.432-0.061=0.371,计算酶活得:S-LPS (U/g 土样) =43.2×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=43.2×0.044÷0.371÷0.03=170.78 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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