土壤脂肪酶(S-LPS)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格: 50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/c6f3bd85-0886-473c-b35a-17963fc6d6a3.jpg)
溶液的配制:
1、 标准品:临用前加入 1.97 mL 甲苯,即 100 μmol/mL 油酸。用前注意解冻溶解。用不完的试剂可以 2-8℃保存一个月。
2、 工作液的配制:将试剂三临用前加入 20 mL 蒸馏水于沸水浴中溶解,2-8℃保存两周。冷却至常温后加入5 mL 试剂二混合,高速震荡 2 次,每次 3min,间隔 5min。可根据该比例现用现配。
产品说明:
脂肪酶(LPS)又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。该酶在土壤生物动力学中具有重要的作用。
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/892c14f4-de2f-47f5-8457-0716b53a5a69.jpg)
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、震荡混匀器、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯(不可快递)、冰和蒸馏水、30-50目筛。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干,过30-50目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至710nm,甲苯调零。
2、 标准溶液的稀释:取50μL 100μmol/mL油酸标准溶液,加入950μL甲苯,充分混匀,配制成5μmol/mL标准溶液待测,现用现配。(实验中每管需要1mL。)
3、 操作表:取2mL EP管,加入下列试剂
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/3d412b27-ac66-4f3f-9621-24c96c8ef2e0.jpg)
三、S-LPS 活性计算
活性单位定义:37℃中每g土样每天水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
S-LPS (U/g 土样) =ΔA测定÷(ΔA标准÷C标准)×V甲苯÷T÷W=144×ΔA测定÷ΔA标准÷W
V甲苯:加入的甲苯体积,1.2mL;C标准:标准溶液浓度,5μmol/mL;T:催化反应时间,1/24d;W:样本质量,g。
注意事项:
1、甲苯有毒,实验过程中需佩戴手套和口罩。
2、实验过程中须远离火源。
3、当吸光度大于 0.8 时,建议将样本稀释后测量(第二次加入甲苯的量增加)。
4、甲苯可溶解聚苯乙烯/聚丙烯材质。
实验实例:
1、 取两管 0.1g 三叶草土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用 1mL 玻璃比色皿测定吸光值,记为 A 测定管、A 对照管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.195-0.094=0.101,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.754-0.028=0.726,计算酶活得:
S-LPS (U/g 土样) =144×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=144×0.101÷0.276÷0.1=200.33 U/g 土样。
2、 取两管 0.1g 林土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用 1mL 玻璃比色皿测定吸光值,记为 A 测定管、A 对 照 管 。 计 算 ΔA 测 定 =A 测 定 管 -A 对 照 管 =0.143-0.074=0.069 , ΔA 标 准 =A 标 准 管 -A 空 白 管=0.754-0.028=0.726,计算酶活得:
S-LPS (U/g 土样) =144×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=144×0.069÷0.726÷0.1=136.86 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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