碱性木聚糖酶（BAX）活性检测试剂盒 可见分光光度法

碱性木聚糖酶（BAX）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格: 50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 标准品：10mg 木糖。临用前加入 667μL 蒸馏水配制成 100μmol/mL 的木糖标准液，2-8℃保存两周。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、发酵液：发酵液于 8000rpm，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样本。

2、组织样本：称约 0.1g 组织，加入 1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心 15min，取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。

3、酶干粉：称约 1mg，加 1mL 缓冲液溶解，蒸馏水稀释 10 倍待测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液的制备：取 20μL 100μmol/mL 的木糖标准液，加入 980μL 蒸馏水，充分混匀，配制成 2μmol/mL 的标准溶液使用，现用现配。（实验中每管需要 200μL，为减小实验误差，故配制大体积）。

3、 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

三、BAX计算公式

注意事项：

吸光度变化应该控制在0.01~1之间，否则加大样本量或稀释样本，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相 应改变。

实验实例：

1、 取 0.1g 锯齿叶加入 1mL 缓冲液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释十倍后按照测定步骤操作，测得 A 测定=0.924，A 对照=0.671，A 标准=0.761，A 空白=0.163，按样本质量计算酶活得：

BAX 活力（U/g 质量）=0.67×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W2=0.67×（0.924-0.671）÷（0.761-0.163）÷0.1=2.835 U/g 质量。

2 取酵母菌离心取上清按照测定步骤操作，测得 A 测定=1.135，A 对照=1.001，A 标准=0.761，A 空白=0.163，按发酵液计算 BAX 活力得：

BAX 活力（U/mL）=0.067×ΔA 测定÷ΔA 标准=0.067×（1.135-1.001）÷（0.761-0.163）=0.015 U/mL。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！