酰基转移酶(AAT)活性检测试剂盒 微量法

酰基转移酶（AAT）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 提取液：内含不溶物，使用前摇匀。

2、 试剂二：临用前加蒸馏水 1 mL 充分溶解，4℃保存。

3、 试剂四：临用前加入试剂一 1 mL 充分溶解，4℃避光保存。

产品说明：

AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇，同时还原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，测定412 nm吸光度增加速率，来计算AAT活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织样本：称取约 0.1g 样本加提取液 1mL，冰上充分研磨，15000g 4℃离心 20min，上清液待测。

血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、 试剂一在37℃水浴保温20 min以上。

3、 样本测定：

三、AAT活性计算

注意事项：

1、 上清液蛋白质含量需要另外测定。

2、 当吸光值大于1时，建议稀释后测量。

3、 建议一个一个样本测定，一人比色一人计时。

4、 如果ΔA测偏低，可以延长反应时间，如测定10 s和310 s的吸光度，相应修改计算公式中反应时间。

实验实例：

1、 取0.1g肾脏加入1mL提取液进行样本处理，取上清后稀释4倍后按测定步骤操作，用微量石英比色皿测得ΔA空=A2空 -A1空 =0.0849-0.08=0.0049、 ΔA测 =A2测 -A1测 =0.69-0.4929=0.1971、 ΔA=ΔA测 -ΔA空 =0.1971-0.0049=0.1922，按样本质量计算酶活得：

AAT (U/g 质量) =5000×ΔA÷W×4（稀释倍数）=38440 U/g 质量。

2、 取兔血清直接按照测定步骤操作，测得ΔA空=A2空-A1空=0.0849-0.08=0.0049、ΔA测=A2测-A1测0.629-0.5342=0.0948、ΔA=ΔA测-ΔA空=0.0948-0.0049=0.0899，按血清体积计算酶活得：

AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.0899=449.5 U/mL 血清。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！