淀粉分支酶(SBE)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![image 2022060903585722444](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220609/2022060903585722444.png)
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 1 mL 蒸馏水,缓慢加热,逐渐升温至沸腾,使其充分溶解,备用。
产品说明:
SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是参与支链淀粉合成的关键酶,测定 SBE 活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。淀粉和碘结合后在 660nm 有特征光吸收,SBE 可切断支链淀粉侧支,从而降低了淀粉-碘复合物在 660nm 吸收值,一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。15000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至660nm,蒸馏水调零。
2. 样本测定:
![image 2022060903592608030](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220609/2022060903592608030.png)
混匀,室温静置 10min,取 200μL 至微量玻璃比色皿/96 孔板中,660nm 处读取各管吸光值。
注意:若有样本浑浊,建议离心后取上清测定。
三、SBE 活力单位计算
![image 2022060903595919698](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220609/2022060903595919698.png)
注意事项:
1、可以在不同对照管中加入不同的样本,然后集中进行 1min 沸水浴处理。
2、试剂一如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。
实验实例:
1. 取约 0.1g 桃树叶片加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。15000g,4℃离心 15min,取上清置冰上,之后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 A 对照管=0.399,A 测定管=0.277,按样本质量计算酶活得:
SBE 活性(U/g 质量)=(A 对照管-A 测定管)÷A 对照管÷W×23.8=72.77 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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