2024/08/12 09:36
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产品配置单:
移液工作站8道多功能(四板位)
型号: FDT-M8-4-1000
产地: 广东
品牌: FLUIDOT
¥10万 - 30万
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方案详情:
关于fluidot自动移液工作站在食品中黄曲霉毒素B1检测(ELISA法)中的应用
方案摘要:酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) :是酶免疫测定 技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面,使酶标记 的抗原抗体反应 在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法 和间接法。
方案详情:
一、实验原理
试样中的黄曲霉毒素B1用甲醇水溶液提取,经均质、涡旋、离心(过滤)等处理获取上清液。被辣根过氧化物酶标记或固定在反应孔中的黄曲霉毒素B1,与试样上清液或标准品中的黄曲霉毒素B1竞争性 结合特异性抗体。在洗涤后加入相应显色剂显色,经无机酸终止反应,于450nm 或630nm 波长下检 测。样品中的黄曲霉毒素B1与吸光度在一定浓度范围内呈反比。
二、实验准备
1、试剂和材料:配制溶液所需试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定二级水。 按照试剂盒说明书所述,配制所需溶液。 所用商品化的试剂盒需验证合格后方可使用。
2、仪器和设备:
①fluidot自动移液工作站,FDT-M8-4-300
②微孔板酶标仪:带450与630nm(可选)滤光片
③研磨机
④振荡器 SPP-SK-500
⑤电子天平:感量0.01g
⑥离心机:转数≥6000r/min
⑦快速定量滤纸:孔径11μm
⑧筛网:1mm~2mm孔径
⑨黄曲霉毒素B1试剂盒及所要求其它仪器
三、实验步骤 (在 20-24℃条件下操作)
1、称取至少100g样品,固体样品用研磨机进行粉碎,粉碎后的样品过1mm~2mm孔径试验筛。取5.0g样品于50mL离心管中;液体样品取100g待测样品摇匀,称取5.0g样品于50mL离心管中,加入试剂盒所要求提取液。
2、将处理好的样品与试剂盒中的96微孔板、标准品、酶标记物试剂、抗体溶液、显色剂、终止液放置fluidot自动移液工作站的托盘与适配器中。
3、仪器自动取1个吸头吸取标准或处理好的样品加50ul到各自的微孔中,每个标准和样品必须使用新的吸头。
4、仪器自动取8个吸头吸取稀释了的酶标记物加50ul到微孔板底部,丢弃吸头。
5、自动取8个吸头吸取抗体溶液加50ul到每一个微孔底部,小心地使酶标板在平面上做圆周运动以充分混合。在室温下(20℃-25 ℃)孵育30分钟,丢弃吸头。
6、倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。用洗瓶或多通道移液器将 250ul 洗涤缓冲液加入孔中。再次倒出孔中的液体,完全除去孔中的液体,再重复操作洗涤步骤两次以上。
7、自动取8个吸头取基质/显色剂加100ul到微孔中,充分混合并在室温(20℃-25℃)暗处孵育 15 分钟,丢弃吸头。
8、自动取8个吸头取反应终止液加入100ul 到微孔中充分混合。混合好在450nm处测量吸光度值,以空气为空白,必须在加入停止液后15分钟内读取光度值。
四、结果
1、酶联免疫试剂盒定量检测的标准工作曲线绘制
所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标准)的吸光度值再乘以100。因此0标准等于100%并且以百分比给出吸光度值。
计算的标准值绘成为一个以黄曲霉毒素 B1 浓度(ng/kg)的 半对数坐标系统曲线图,相对应每一个样品的浓度(ng/kg)可以从标准曲线上读出。
请注意 :为了获得样品中的黄曲霉毒素 B1 的实际浓度(ng/kg),从标准曲线上读出的浓度值。
2、待测液浓度计算
按照试剂盒说明书提供的计算方法以及计算机软件,将待测液吸光度代入曲线图所获得公式,计算得待测液浓度(ρ)。
3、结果计算
食品中黄曲霉毒素B1的含量计算:
计算结果保留小数点后两位。
阳性样品需用第一法、第二法或第三法进一步确认。
4、精密度
每个试样称取两份进行平行测定,以其算术平均值为分析结果。 其分析结果的相对相差应不大于20%。
5、其他
当称取谷物、坚果、油脂、调味品等样品5g时,方法检出限为1μg/kg定量限为3μg/kg。 当称取特殊膳食用食品样品5g时,方法检出限为0.1μg/kg,定量限为0.3μg/kg。
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