pipetti电动移液器在PCR实验中的应用

Pipetty电动移液器PCR实验中的应用

PCR ：聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制。

PCR  (10ul体系)

1、实验准备:

1、MSIC01-02-250 、MSIC01-02-20电动移液器各一把

2、配套吸头FDT-10A-1-TLSF、FDT-GL-200-TS

3、1.5ml去酶EP管

八联管及管盖

PCR管盒

引物

TBgreen

DEPC水

Sample

镊子

笔

2、计算:

10ul体系: 1ul cDNA + 9ul 其他

9ul其他: 0.1ul上引物 + 0.1ul下引物 + 5ul TBgreen + 3.8ul DEPC水

1个sample: 1个主孔2个复孔(3个平行孔)

1个target: sample的数量x 3(3个平行孔) + 2一般多配两个孔的量

例如 : 6个sample，4个target，每个target就是6 (6个sample) x 3(3个平行孔) + 2 (一般多配两个孔) = 20，( 0.1ul上引物+0.1ul下引物+ 5ul TBgreen + 3.8ul DEPC水)

2ul上引物 + 2ul下引物 + 100ul TBgreen + 76ul DEPC水

操作步骤

1、取出1.5ml去酶EP管，标记target，加入对应量上引物 、下引物、TBgreen、DEPC 水 ( 先加DEPC水，再加TBgreen ，最后加引物，注意枪头必须伸入液面以下并吹打均匀 )

震荡离心备用

Sample离心备用

按所需布局在PCR管盒中放置好八联管

上样 ( 注意每个孔操作保持一致，上样误差才会小)

先加 9ul其他 ( 我习惯是用 20u量程的枪沿壁加，枪头里不会有液体残留也不容易打出气泡，液体会自然流进管底，同一个target上样期间不需要换枪头，一个target加完再换下一个target ) 后加1ul cDNA ( 枪头伸入液面以下，一边打一边抬离液面)

上样结束后，盖上八联管盖，离心。