据媒体报道,台北市近日发生一起食物中毒案,经台北市卫生部门证实,这起“宝林茶室”中毒案重症患者共7人,有6人死亡。根据尸体解剖分析,确认检测到有毒物质米酵菌酸成分。
米酵菌酸由发酵的谷物、椰子及食用菌等受污染后产生,毒性强烈,无色无味,且在高温下稳定,主要影响肝脏、脑、肾等重要器官,只需1毫克即可致命。
在炎热的夏季,天气高温潮湿,类似河粉、肠粉、粿条、凉皮等湿米粉以及泡发的银耳、木耳等食品,容易滋生椰毒假单胞菌从而产生米酵菌酸毒素,而这些食品都有一个共同点,就是要经过长时间的浸泡和发酵。
因此在夏季,生湿面制品和酵米面制品中米酵菌酸的检测是及其重要的。美正生物高度重视米酵菌酸的检测,针对凉皮基质推出新的应用方法,为百姓的食品安全尽一份力。
仪器设备
PerkinElmer QSight 液相色谱串联质谱仪
PerkinElmer LC 300 高效液相色谱-紫外检测器。
试剂材料
甲醇、甲酸、乙腈为色谱纯,氨水为分析纯;
甲醇-氨水溶液:量取 800mL 甲醇,加入 10mL 氨水,用水稀释并定容至 1000 mL,混匀;
2%甲酸甲醇溶液:吸取 2mL 甲酸,用甲醇稀释至 100mL ,混匀;
PolyPlus MAX 固相萃取小柱:60 mg/3 mL,P/N:CSS0025。
Robussil C18 Plus 色谱柱:5µm ,4.6 × 250 mm ,P/N:CSH952505-P。
样品制备
鲜(湿)试样经剪碎,匀浆后称取 10g ,加入 80mL甲醇-氨水溶液,混匀,室温下避光 浸泡1h ,置于超声波振荡器中超声提取30min,8000r/min 离心 5min(也可以直接过滤),取上清液或滤液 40mL ,置50℃ 水浴中减压浓缩至约 3mL,待净化。
将待净化液全部转移到用5mL甲醇和5mL水已活化的固相萃取柱中,依次用 5mL水和 5mL甲醇淋洗,弃去流出液,抽干萃取柱,再用 6mL 2%甲酸甲醇溶液洗脱,收集洗脱液,于50℃水浴中氮吹至近干,然后加入1mL 75%甲醇水溶液,涡旋溶解,混匀,经有机PTFE针式滤器过滤后进行HPLC分析 或LC-MS/MS分析。
取高浓度米酵菌酸标准溶液,用空白样品基质溶液稀释75ng/mL和750ng/mL的基质混合标准工作溶液。
色谱条件
色谱柱:Robussil C18 Plus ,5 µm ,4.6 × 250 mm;
流动相A:甲醇+水=75+25 ,水用冰乙酸调 pH 至 2.5;
流速:1.0 mL/min;
柱 温:25℃;
进样量:50 µL;
LC-MS/MS条件
色谱柱:Kinetex F5 ,2.6µm ,3.0×50mm;
流动相A:0. 1%甲酸水;
流动相B:乙腈;
柱 温:40℃;
进样量:10µL;
梯度洗脱:
液相色谱梯度洗脱条件
质谱条件
离子源:ESI- ;
雾化气:200;
电喷雾电压:-4500 V;
离子源温度:275℃;
反吹气:80;
质谱接口温度:280℃;
采集方式:多反应监测(MRM)。
质谱参数
注:本实验中所有离子对都以第一组离子对作为定量离子对。
凉皮基质加标回收实验结果
(HPLC ,添加水平 0. 15 mg/kg ,n=3)
凉皮基质加标回收实验结果
(LC-MS/MS ,n=3)
0.75 μg/mL 米酵菌酸标准工作溶液色谱图
凉皮基质空白色谱图
0. 15 mg/kg 凉皮基质加标色谱图
LC-MS/MS 图谱
70 ng/mL 米酵菌酸标准工作溶液色谱图
50 ng/mL 米酵菌酸凉皮基质混合标准工作溶液色谱图
凉皮基质空白色谱图
0.015 mg/kg 凉皮基质加标色谱图
本实验参考GB 5009.189-2023建立了凉皮中米酵菌酸的检测方法,并结合HPLC 对加标量为0. 15 mg/kg的凉皮样品进行了检测。结果表明,使用MAX 固相萃取小柱对凉皮基质进行净化,米酵菌酸回收率均满足检测要求且RSD 小于10% 。说明该方法适用于凉皮中米酵菌酸的检测,且方法稳定。此方法检出限为0.016 mg/kg ,定量限为0.055 mg/kg,使用LC-MS/MS 检测检出限为0.00012mg/kg ,定量限为0.00040 mg/kg 。
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