小鼠胚胎干细胞D3

                      小鼠胚胎干细胞D3 百欧博伟生物

细胞简介

平台编号：bio-54191

提供形式：复苏状态 

拉丁属名：D3

细胞名称：D3；小鼠胚胎干细胞D3

中文名称：小鼠胚胎干细胞D3

描述：小鼠全能性胚胎干细胞，每支细胞量1×106

动物种别：小鼠，129/Sv+c/+p品系 

组织来源：小鼠囊胚内细胞团

形态：球形克隆

培养基和添加剂：mES完全培养液配方（600 ml）： DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ES级FBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl（终浓度为1000U/ml） β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml 

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。

温度：37摄氏度。

供应限制：仅供研究之用。

REFERENCE：Doetschman TC, et al. The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium. J. Embryol. Exp. Morphol. 87: 27-45, 1985. PubMed: 3897439 Williams RL, et al. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells. Nature 336: 684-687, 1988. PubMed: 3143916 Gossler A, et al. Transgenesis by means of blastocyst-derived embryonic stem cell lines. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 9065-9069, 1986. PubMed: 3024164 Doetschman T, et al. Targeted mutation of the Hprt gene in mouse embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 8583-8587, 1988. PubMed: 3186749 Chambon P, et al. Genetically engineered mice containing alterations in the genes encoding retinoic acid receptor proteins. US Patent 6,486,381 dated Nov 26 2002

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

细胞的运输保存

采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按指定条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。

小鼠胚胎干细胞D3的一般培养方法

1、组织块培养法

A）按照前述方法取材，将组织剪成或切成1mm3大小的小块，并加入少许培养基使组织湿润。

B）将小块均匀涂布于瓶壁，每小块间距0.2 cm～12.5px，一般在25mL培养瓶（底面积为437.5px2）可接种20～30小块为宜，小块放置后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞，将瓶倾斜放置在37℃温箱内。

C）培养2～4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防D3小鼠胚胎干细胞由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块 不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养初期移动和观察时要轻 拿轻放，开始几天尽量不去搬动，以利贴壁和生长，培养3～5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。

2、消化培养法

该方法是采用前述的消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。

3、悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

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