T4 DNA Ligase

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产品描述：

产品名称：T4 DNA Ligase

描述: 在有Mg²⁺和ATP存在的条件下，T4 DNA Ligase能催化双链 DNA或RNA上相邻的5′-磷酸末端和3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化双链DNA的平末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻，但不能催化单链 DNA 之间的连接。
酶储存缓冲液：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5) ，50mM KCl，1mM DTT， 0.1mM EDTA，50% (v/v) glycerol。
5 × T4 DNA Ligase Buffer
250 mMTris-HCl (pH 7.5)， 50mM MgCl2，50mM DTT， 5mM ATP，连接促进剂。

来源: 纯化于携带T4 DNA ligase 基因 的E. coli 菌株。

浓度: 5U/μl

储存/保存方法: -20℃保存，有效期12个月。

技术指标:

抑制剂和热失活：
大于200mM的NaCl或KCl可以强烈抑制连接酶活性。65℃加热 10分钟或70℃加热5分钟即可失活。
单位定义：
在37℃，20分钟内交换1 nmole 的³²PPi所需要的酶量定义为一个Weiss单位。本产品酶1U(Weiss Unit)相当于200个粘性末端单位。在T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃条件下，30分钟能够使50%的经Hind III消化的λDNA 片段连接所需要的酶量为一个粘性末端单位。

质量控制：
蓝白斑分析实验表明白斑数小于2%;过量T4 DNA Ligase 混合超螺旋质粒检测实验表明无核酸酶检出；SDS-PAGE检测重组蛋白纯度大于99%。

注意事项: 1、化冻 5×T4 DNA Ligase Buffer 后，需要混匀后再使用。
2、T4 DNA Ligase 最适活性温度为 37℃，但是高温连接形成的连接产物的转化效率会大大降低，所以选用 25℃或 16℃等稍低的连 接温度。如果连接产物不用转化且需要高的连接效果，可以在 37℃条件下进行。
3、该酶需要 Mg 2+为激活剂，因此螯合 Mg 2+的 EDTA 的存在会阻碍连接反应。溶解于高浓度 EDTA 缓冲液的 DNA 需要用灭菌水或 TE 缓冲液进行置换。

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