OverExpress C43(DE3)感受态细胞

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产品描述：

产品名称：OverExpress C43(DE3)感受态细胞

描述: OverExpressC43(DE3)菌株适用于毒性蛋白的表达，来源于OverExpressC41(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通过毒性蛋白在BL21(DE3)内过表达筛选实验得到的基因突变菌株,该菌株的基因突变降低了T7 RNA聚合酶的酶活性，下调毒性蛋白的表达量使细胞存活。OverExpress C43(DE3)菌株是通过另一个毒性蛋白对OverExpress C41(DE3)菌株再次进行毒性耐受性实验获得的，OverExpress C43(DE3)菌株比OverExpress C41(DE3)更加耐受毒性蛋白。OverExpress C43(DE3)菌株也可以表达常规蛋白，相同条件下，蛋白表达量略低于BL21(DE3)菌株。OverExpressC43(DE3)菌株属于B菌株，lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpress C43(DE3)感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19质粒检测转化效率可达1×10⁷ cfu/μg DNA。 
基因型：
F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3)  
菌株抗性：
对氨苄青霉素，卡那霉素，氯霉素和四环素敏感。

使用方法: 质粒转化步骤：（以氨苄青霉素抗性的 pET 质粒为例） 1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。 2、冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。 3、42℃热击 60 秒钟，不要晃动。 4、冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。 5、加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。 6、置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟。 7、取 50-100μl 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养 12-24 小时。 平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。 蛋白表达步骤： 1、挑取单菌落，接种到含 5ml 带抗生素的 LB 培养基中。 2、37℃，200rpm 震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）。 3、加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM，37℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜。（可以设定不同浓度的 IPTG 来诱导表达） 4、诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）。 5、重组蛋白大量表达时，可用 10ml 过夜培养物转接到 1L 培养基中，当培养到 OD600=0.4-0.8 时，加入终浓度为 0.4mM 的 IPTG，37℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜（不同蛋白表达的最佳条件有所不同，需在实验中优化）。

储存/保存方法: -70℃保存，避免反复冻融

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