T7表达感受态细胞

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产品描述：

产品名称：T7表达感受态细胞

描述: T7 Express菌株为大肠杆菌BL21增强型菌株，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，主要适用于含有T7启动子的原核表达载体（如pET等）的蛋白表达，同样适用于需要大肠杆菌RNA聚合酶来转录RNA的非T7启动子的表达载体（如pGEX等）。该菌株区别于BL21（DE3）菌株的优势在于T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，并具有抗T1噬菌体感染等特点。T7表达感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于10⁸ cfu/μg。
基因型：
fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 (mcrCmrr)114::IS10
菌株抗性：
对氨苄青霉素，卡那霉素，壮观霉素，氯霉素，链霉素和四环素敏感。

使用方法: 质粒转化步骤： 1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 或 5-10μl 连接产物到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀； 2、冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动； 3、 42℃热击 60 秒钟，不要晃动； 4、冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动； 5、加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基； 6、置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟； 7、取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。 平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。 质粒快速转化步骤：将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤 4 完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。 蛋白表达步骤： 1、挑取单菌落，接种到含 5ml 带抗生素的 LB 培养基中； 2、37℃，200rpm 震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）； 3、加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM，37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜； 4、诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法） 分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）； 5、大量表达时，可用10ml过夜培养物转接到1L培养基中，当培养到OD600=0.4-0.8时，加入终浓度为0.4mM 的 IPTG，37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜（不同蛋白表达的最佳条件有所不同，需在实验中优化）。

储存/保存方法: -70℃保存，避免反复冻融

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