NP-40 Lysis Buffer

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产品描述：

产品名称：NP-40 Lysis Buffer

储存/保存方法: -20℃冻存

描述:

NP-40，也称 Nonidet P-40（乙基苯基聚乙二醇），是一种常见的非离子型去垢剂。

NP-40 裂解液（NP-40 Lysis Buffer）是一种比较温和的细胞组织裂解液，主要成分为 50mM Tris-HC（l pH 7.4），150mM NaCl，1% NP-40 以及焦磷酸钠，正钒酸钠，氟化钠，EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂，可广谱且有效抑制蛋白降解，经本品裂解所得的蛋白样品，适用于常规的蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP）等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂，不适合用 Bradford 法来测定总蛋白浓度。

别名: NP-40裂解液

使用方法: A培养的细胞样品 （1）充分融解 NP-40 裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入 PMSF（Mw：174.2 g/mol），使其最终浓度为 1mM。 （2）贴壁细胞：吸除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可忽略此步）。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。裂解 15-30 分钟，通常裂解液接触细胞 1-3 秒后，细胞就会被裂解。 悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。 （3）充分裂解后，10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫沉淀等实验。 【裂解液用量说明】：通常 6 孔板每孔细胞加入 150ul 裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200ul 或 250ul。 B组织样品 （1）将组织剪切成细小的碎片。 （2）充分融解 NP-40 裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入 PMSF（Mw：174.2 g/mol），使其最终浓度为 1mM。 （3）按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可适当降低用量。】 （4）用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解，此过程尽量控制在 1-2 分钟内，以减少蛋白的降解。 （5）充分裂解后，10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫沉淀等实验。 （6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分，之后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分.

注意事项: 1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 2、不同的细胞需要加入的裂解液的量可能会不同，需要根据具体条件进行条件筛选； 3、为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。

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