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【应用分享】中药苍耳子中绿原酸含量测定(中国药典)
中药材成分复杂，其提取往往是通过煎煮、浸渍、回流以及超声等方法将目标有效成分提取到溶剂中，然后进行测定。提取有效成分的同时往往也会有非常多的杂质被提取到溶剂中，导致分离难度增加、色谱柱污染加快，寿命降低。今天，咱们就以苍耳子中绿原酸的分析为例，聊一聊中药材分析中色谱柱的使用注意事项及维护建议。
《中国药典》2020版中明确要求苍耳子含量测定中理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。
本次采用高效液相色谱（HPLC）检测，选用纳谱分析ChromCore 120 C18, 5μm, 4.6×250mm色谱柱对苍耳子进行分离和检测，色谱检测条件与测定图谱如下：
选用纳谱分析ChromCore 120 C18色谱柱对苍耳子进行分离和检测，主峰峰形良好，周围无干扰杂峰，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于苍耳子的含量测定为该药物的质量保证提供检测依据。
针对中药材分析中色谱柱使用及维护的建议
1
尽可能提高样品的干净程度：导致中药材分析中色谱柱寿命短的原因中，样品基质复杂引起的色谱柱污染首当其冲，因此尽可能提高上机样品溶液的干净程度是延长色谱柱寿命的一大关键因素。
其方法包括：1.上机前使用0.22 μm滤膜进行过滤，确保没有不溶性固体微粒进入到色谱柱堵塞柱前筛板；
2.必要时使用固相萃取小柱进行目标成分的纯化和富集。
2
干净的流动相：分析过程中，流动相会源源不断的经过色谱柱，流动相不干净、长菌也会加快色谱柱的使用寿命。因此建议：水相（包括缓冲盐）当天现配，当天使用，以防长菌；缓冲盐配置好后一定要使用滤膜过滤后再上机。
3
当流动相比例差异非常大的情况下（例如：绿原酸测试比例是90%/10%，有些项目比例差异更大），仪器的比例控制和混合准确度会下降，导致保留时间不稳定和基线波动大的问题。建议将流动相预先混合成一相，充分混匀并超声后走单泵进行测试。
4
使用保护柱或者在线过滤器降低色谱柱污染。
5
当目标成分极性比较大的时候，往往会选择高比例水相进行洗脱。流动相中水相比例超过90%时，建议选用可以耐受100%水相的色谱柱进行测试，防止色谱柱不耐高水相而引起的键合相塌陷（出现由于长时间运行高水相引起的相塌陷时，可尝试使用纯乙腈，以0.2 mL/min的流速过夜冲洗，通常会有一定的恢复）。
6
色谱柱日常冲洗：使用后的反相色谱柱先使用比流动相比例稍高的水相冲洗色谱柱5-10倍柱体积，过渡掉流动相的中的缓冲盐（没有缓冲盐的话这一步可以省略），然后过渡到80%以上有机溶剂中冲洗10倍柱体积，封存。样品基质特别复杂的情况下，建议能够延长日常冲洗时间或者定期进行深度冲洗。
7
色谱柱异常冲洗：如果色谱柱在使用一定时间后出现异常，包括峰形的变化、拖尾、峰分裂、肩峰、高背压或柱效的变化，用户可尝试按以下步骤进行清洗：
第一步：10% 0.1%磷酸水甲醇 30倍柱体积
第二步：50%去离子水/50%甲醇或乙腈（10倍柱体积）
第三步：100%异丙醇（60倍柱体积1/5做样流速12小时）
第四步：100%甲醇或乙腈（5倍柱体积）
注意：
1.在对色谱柱进行清洗时，为避免色谱柱上的污染物或其他物质进入流通池，需断开色谱柱与检测器之间的连接；
2.在进行色谱柱清洗再生时，建议使用平时使用流速的10-50%进行操作，防止因溶剂粘度过大而造成柱压的激增；
3.当遇到高背压情况时，可以按上述程序进行反冲色谱柱。
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