单细胞柔性分选结合CRISPR Cas9技术新应用

Namocell

2024/03/13 09:47

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近期，一篇文章报道了巨噬样细胞的SAMHD1基因编辑最新进展，揭示了SAMHD1磷酸化调控、HIV-1限制和细胞dNTP水平之间的复杂关系。

SAM和HD结构域蛋白1 (SAMHD1)是一种dNTP三磷酸水解酶(dNTPase)和免疫缺陷病毒1 (HIV-1)的有效限制性因子，活跃在骨髓细胞和静息CD4+ T细胞中。SAMHD1的抗病毒活性受残基T592的去磷酸化调控。然而，T592磷酸化对dNTPase活性的影响仍存在争议。SAMHD1的其他细胞功能是否影响抗病毒限制尚不完全清楚。

作者报道了BLaER1细胞作为一种新的人类巨噬样细胞HIV-1感染模型结合CRISPR/Cas9敲入(KI)技术将特异性突变引入 SAMHD1位点以研究生理背景下的突变。转分化的BLaER1细胞含有活性去磷酸化的SAMHD1，可阻断HIV-1报告病毒的感染。正如预期的那样，纯合子T592E突变，而不是T592A，缓解了HIV-1逆转录的阻滞。将VLP-Vpx共同递送到SAMHD1 T592E KI 突变细胞中并没有进一步增强HIV-1感染，这表明缺乏独立于T592去磷酸化的SAMHD1介导的额外抗病毒活性。T592E KI细胞保留的dNTP水平与WT细胞相似，表明SAMHD1的抗病毒和dNTP酶活性解耦。SAMHD1中催化位点的完整性对于抗病毒活性至关重要，然而在携带催化核心突变的细胞中观察到HIV-1 限制与整体细胞dNTP水平的低相关性。总之，强调HIV-1限制，SAMHD1酶功能和T592磷酸化调节之间关系的复杂性，为内源性和生理背景下的研究提供了新的工具。

研究中作者将BLaER1细胞进行CRISPR/Cas9基因编辑后，使用Namocell Hana单细胞分离仪进行单细胞分选，或者有限稀释法进行单克隆培养，筛选出目的细胞克隆。