液相色谱使用干货（四）| 基线那些事儿

液相色谱使用干货（四）| 基线那些事儿

众所周知，在色谱分析中，平稳的基线是目标物准确定性和定量的基础。但实验过程中，基线有时难免会“任性”一下，要么变得异常“狂躁”导致基线噪音过高，要么就“放纵的漂啊漂啊”引起基线漂移。下面为大家总结了液相色谱基线异常的常见原因及解决方案：

一、基线噪音高

1）流通池污染

流通池污染后，透镜表面残留的污渍导致入射光的光通量不稳定，进而引起目标物的吸收不稳定。

解决方法：采用合适的流动相进行冲洗，一般可按照甲醇—异丙醇—甲醇的顺序清洗，若杂质残留较强，可选择甲醇—水—0.1M硝酸—水（洗到中性）—甲醇/异丙醇的方式进行清洗。

2）灯能量不足

当灯的寿命接近限值时（一般为2000h），灯能量变得不稳定，导致目标物的吸收也不稳定。当检测波长接近末端吸收时，基线噪音的波动表现尤为明显。

解决方法：更换新灯。

3）色谱柱污染

当色谱柱污染后，残留较强的杂质可能在基线采集过程中不断被冲洗出来，若杂质具有紫外吸收，会引起较高的基线噪音。

解决方法：每天实验结束后按照使用说明书冲洗色谱柱或根据需要更换新的色谱柱。

4）响应时间设置不合理

响应时间是检测器对信号变化响应速度的量度，值越小说明检测器反应越快，在精确绘制峰形的同时，基线噪音也随之增加，色谱峰上会出现很多明显的“毛刺”。

解决方法：建立仪器方法时，根据推荐值设置响应时间。

另外流通池中存在气泡、流动相混合不均匀、流路存在泄漏等均可引起基线噪音升高。

二、基线漂移

1）流动相杂质过多

梯度运行时，基线漂移的现象尤为明显。若流动相中杂质较多，梯度运行过程中，溶剂组成逐渐发生改变，流动相的紫外吸收也发生相应变化，从而引起基线漂移。

解决方法：使用纯度高的流动相。

2）平衡时间不足

当系统未完全平衡或灯预热时间不足时，会造成系统压力变化或灯能量不稳定，引起基线偏移。

解决方法：进样前采用初始流动相平衡流路，直到基线平稳并符合进样要求。

3）流动相混合不均匀

流动相混合不均匀会引起系统压力波动，导致基线不平稳。

解决方法：更换更大的静态混合器。对于等度分析，可提前将流动相混匀。

4）柱温波动

通常对示差折光检测器和电导检测器影响较大。柱温箱温度变化时，对于示差检测器：经过流通池的溶液密度发生变化，折光率相应改变，使得光束经过参比池和流通池时，偏转角度发生变化；对于电导检测器：温度影响物质的电导率。

解决方法：减少柱温箱前面板的开关次数，另外可以在柱后接入热交换器（柱后冷却器），使进入流通池的温度始终恒定。

最后是“灵魂质问”环节：

灯寿命到了如何更换？

流通池冲不干净或发生碎裂如何更换？

色谱柱如何进行清洗和维护？

如何设定一个较长的平衡时间让仪器自动启动序列分析？

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