液相色谱使用干货（五）| 反相色谱柱的使用和维护

液相色谱使用干货（五）：反相色谱柱的使用和维护

色谱柱是液相色谱的核心部件之一，主要起到分离作用。分析实验结果的好坏，和色谱柱的选择以及当时柱子的状态可是有着很大的关系哦！所以在平时使用好和维护好它那是相当重要的。

色谱柱的类型按材质或者机理可以分有多种，不同的色谱柱使用的条件和要求也会不一样，各位读者大大要记得看说明书哦！一般的实验室都会配有反相C18的色谱柱，因为该种柱子的应用最为广泛，所以小编这里就以大家最常用的反相色谱柱为例进行介绍，看看我们在平时使用时有哪些知识点和注意事项！！

色谱柱柱效测试

赛默飞生产的反相色谱柱出厂时都有经过柱效测试，所用化合物为茶碱、邻二甲苯，对硝基苯胺、苯甲酸甲酯和二甲苯。（如有不同，以柱效报告为准）。

在条件允许情况下，请参考COA报告中的条件，对新色谱柱进行柱效测试。

色谱柱安装

请小心操作色谱柱。 

不要摔、碰色谱柱，这样会损坏色谱柱床，使色谱柱性能下降。 

使用合适的连接管路和接头，确保色谱柱连接处死体积降到最低（使用不锈钢接头时需尤其注意）。我们建议使用Viper接头，此接头与Thermo色谱柱以及其他品牌色谱柱均完美匹配。

色谱柱活化平衡

在进行分析之前，请使用不含盐的流动相平衡柱子20倍柱体积，以使色谱柱达到平衡。

色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算：

V=0.68 π (r/2)²L

V 为色谱柱柱体积（mL），r 为色谱柱内径（cm），L 为色谱柱长度（cm）。

色谱柱保护

对于“脏”的样品以及组分未知的样品，请尽量使用在线过滤器或保护柱，如果可能，请使用SPE小柱对样品进行前处理。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。

色谱柱使用温度

硅胶基质色谱柱使用温度一般应低于60℃。

色谱柱清洗

u  常规清洗

1. 请使用至少20倍柱体积的含有≥30水的极性有机溶剂（如乙腈）作为流动相以除去柱子中的缓冲盐。

2. 使用至少20倍柱体积的含有95%极性有机溶剂（如乙腈）清洗柱子。

u  污染物的去除

常规清洗后柱效没有明显恢复时，使用50%异丙醇/乙腈以低流速（不要超过色谱柱的最大耐受压力）清洗20倍的柱体积以去除污染物。

色谱柱保存

清洗完成后，将反相色谱柱保存在高比例的有机相中（推荐80%有机相20%水）。

注意：如果违反上述规程，可能使色谱柱失去保修。

色谱柱常见问题及解决方案建议

一、柱头塌陷（峰拖尾、分叉）

可能原因及解决方案：

Ø  骤然高压

开关机走流速梯度

Ø  硅胶降解

请在色谱柱pH耐受范围内使用

二、柱头污染（峰拖尾、肩峰、峰分裂、杂质峰）

可能原因及解决方案：

Ø  样品引入污染物

进行样品前处理步骤

Ø  流动相引入污染物

使用色谱纯的试剂和盐，上机前过滤

Ø  仪器管路引入污染物

使用适当溶剂冲洗仪器管路，增加保护柱或在线过滤器

三、柱压高

可能原因及解决方案：

Ø  柱头筛板堵塞

低流速不接检测器反冲

Ø  柱头污染严重

使用清洗再生办法冲洗

Ø  仪器管线堵塞

使用适当溶剂冲洗仪器管路

Ø  色谱柱粒径太小

选择小粒径色谱柱时要考虑仪器的耐压

Ø  流动相粘度过高

使用粘度较低的溶剂或适当升高柱温

Ø  盐沉淀或析出

保证流动相的兼容性

重要的事情说三遍：请看说明书！请看说明书！请看说明书！

若上述内容与色谱柱说明书不一，均以说明书为准。

更多学习内容，欢迎请参加赛默飞的液相色谱培训班！

拨打400-650-5118，或关注“赛默飞服务平台”官方微信号，了解我们的课程信息。

多种好课，任您选择！