数字PCR作为靶标核酸的精准绝对定量技术，具备高灵敏度、抑制剂耐受力高，可区分微小差异等技术特性，在CGT细胞与基因治疗中，数字PCR技术有诸多应用，包含核酸质控品定值、病毒基因组滴度测定、GOI拷贝数检测、质粒样品拷贝数检测，还包含在产品的外源污染物的生物安全方面。新一代微滴芯片数字PCR技术，自动微滴体积质控和智能可视化数据分析，实现一步操作，双倍效能，为细胞基因治疗科学家提供可靠的核酸工具。本期我们邀请到两位嘉宾，法国Stilla数字PCR系统应用专家张艳辉老师和湖州申科生物技术有限公司技术总监宗伟英老师，分别为大家介绍naica®微滴芯片数字PCR系统和数字PCR平台在细胞基因治疗行业的应用实践。直播时间：4月28日下午3：00主要内容：1、创新型naica®微滴芯片数字PCR系统介绍2、数字PCR平台在CGT行业的应用实践主讲人：张艳辉，法国Stilla数字PCR系统应用专家。专注PCR技术领域的应用，从事数字PCR技术近十年，在数字PCR技术应用，方法学设计和验证具备丰富的经验，致力于创新前沿技术的应用推广。宗伟英，湖州申科生物技术有限公司技术部总监。专注于生物制品的质量控制研究，基于新一代微滴芯片数字PCR系统在细胞与基因治疗行业的应用中，积累非常丰富的经验并取得了突破性进展。湖州市1112人才工程培养人选，累计申请发明专利十余项，其中7项发明专利已获授权，部分专利实现产业化并上市销售。      扫描下方海报内二维码报名      

①  起源 ”我们已经迈入了后基因组时代，而在这个时代，数据和分子工程学领域的发展以及一些新框架为我们带来了无限可能。研究人员、工程师和生物技术公司正在超越“仿生”范式。生物学、工程学、纳米技术和 IT 之间的界线变得越来越模糊。我们在其中看到的不只是逐步迭代。纵观现代医学发展史，会发现在大部分阶段，技术与生物学之间都有着复杂的关系。笛卡尔主义的早期实践者强调人体与复杂机械系统之间的相似之处。其他思路则采用了更加全面的观点。无论如何，在过去的两个世纪，关键的医学创新都离不开技术与生物学的共同作用。青霉素其实仅仅就是窗台上的培养皿里出现的一种霉菌，仅仅是生物学领域的一个意外而已。但是由于 20 世纪的技术革新，才使得生产抗生素、对抗传染病成为可能。再到最近一二十年，IT 开始在医疗领域发挥更大的作用。2004 年首次完成人类基因图谱，而且研究人员得出一个意义深远的结论：人体并非一台机器那么简单。人类及构成人体的复杂生物系统是超过 40 亿年演变的产物，而这种演化过程中不断迭代、改进和完善的规模是我们难以想象的。当然也不仅仅是人类。整个世界都是由生物系统构成的，而这些生物系统远远超出了人类在工程学方面的最新研究深度，比如蜘蛛丝的抗张强度是钢的数倍、可以从抗辐射植物中提取纳米级细丝、眼睛的分辨率高于大多数相机等等。这对医疗卫生行业意味着什么？研究人员已经认识到人类所面临的挑战不仅仅是由于生物学造成的。②  什么是生物融合？”生物融合是介于医疗卫生和生命科学研究中的一个产业领域，强调工程/技术和计算机化系统之间的协同作用。生物融合基于这么一种理解，即生物技术的两个支柱-生物学和技术，并不像表面看来那样难以调和。生物融合并不仅限于生物技术链中的特定阶段。这是一种可以端到端应用的方法。从组学和生物打印到仿生学，再到诊断学，许多新兴的生物技术领域都是以生物融合范例为基础的。毕竟，生物学本质上也只是经过数十亿年改进和完善的工程学而已。③  医疗卫生领域新前沿”在过去的一个世纪里，我们在应对传染病方面取得了长足的进步，例如天花、流感、小儿麻痹症等，还包括现在的 Covid19。在过去的三十年里，我们在艾滋病毒/艾滋病疗法方面的进步挽救了数百万人的生命，抗逆转录病毒疗法能够让艾滋患者生存得更长久。尽管已经进行了大量投资和研究投入，但我们在应对癌症、心脏病和慢性器官衰竭等慢性疾病方面的进展甚微。造成这种差异背后的原因是什么？答案就是个人因素。就慢性病而言，任何两名患者的经历都是不同的。患者的疾病原因不同，合并症也可能不同，而且由于常规治疗方案成本和需求方面的原因，患者获得护理的机会也会有所不同。在过去的几十年里，化学疗法等常规治疗方法挽救了无数生命，而且还在不断的改进和完善，治疗效果也正在逐步改善。不过，我们还有很多事情可以做。举例来说，生物融合在对抗癌症方面有着具有巨大的潜力，可以帮助医生通过基于组学的肿瘤特征分析、微型化给药和组织置换来定制治疗方案。基于组学的分析可以帮助医生识别肿瘤中的特定突变和生物标志物，进而缩小有效治疗方案的范围。微型化给药可将药物输送到特定的癌症影响区域，而不会损坏周围的组织。生物融合也将会让肿瘤成功切除后进行完整的组织置换成为可能。尽管生物融合这种概念早已出现，但是由于其成本高昂、周转周期较长，导致基于生物融合的治疗方法并未受到市场的青睐，直到最近这一状况才有所改变。现在，下一代 DNA 测序等相关技术的发展有助于降低基于生物融合的治疗方法的成本，并缩短其周转周期。测序可以帮助医生确定潜在的遗传风险因素。还有助于研究人员快速识别不同类型的癌症和病原体。④  生物融合产业”对于生物技术、生命科学乃至机器人技术等相关行业而言，生物融合意味着迈出了重要一步。生物融合正在推动着研发基础设施的转型，而正是这些基础设施推动了医疗卫生领域在近十年的创新。在行业层面上，生物融合解决了每个生物技术公司都面临的一个基本问题：弥合分子工程专业知识与生物学之间的鸿沟。这对采购和预算分配产生了实际影响。负责实际操作实验室技术（及故障排除）的工程师的期望和需求与研究团队完全不同。CELLINK将生物融合视为当前的第一要务，旨在弥合这一差距，实现灵活性并提升效率。通过听取工程师和研究人员的意见，我们已经能够在 BIO X 3D打印机等产品中实现一流的功能。从多打印头配备到十倍分辨率提升，再到细粒度温度控制，BIO X 的设计目标是解决限制上一代生物打印机性能的诸多问题。实现灵活性、快速迭代并节省成本。

什么是免疫荧光技术？免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。免疫荧光方法中主要步骤：1）冰冻切片制备                2）组织切片固定3）血清封闭                4）一抗孵育条件5）二抗孵育条件                6）复染                  7）封片                       8）切片清洗荧光显微镜标本制作要求：1、载玻片：载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光，有时需用石英玻璃载玻片。2、盖玻片：盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。3、标本：组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。4、封裱剂：封裱剂必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。5、镜油：必须使用无荧光镜油。荧光玻片如何来检测呢？荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过荧光显微镜来观察。Revolve Gen 2正倒置一体电动荧光显微镜★    高分辨率3D成像，获得最佳成像效果★    正倒置一体，一机两用★    智能化操作，高效便捷

荧光显微镜的软件界面让你伤透脑筋，不知该怎么调整？荧光通道切换需要调整的东西太多，切换时总出错？观察时间太长，眼睛总是盯着目镜酸涩难忍?厚样品总是成像不理想？如果你有这些烦恼，那就来深蓝云直播间试试Revolve Generation 2正倒置一体电动荧光显微镜吧。直播时间：4月26日下午15:00主要内容：1、高分辨率3D成像2、智能化操作流程3、正倒置一体应用主讲老师：王潇/张嗣天王潇：高级应用工程师，具有5年以上显微镜使用和展示经验，在显微镜原理、使用和维护方面有着丰富的经验。张嗣天：毕业于北京农学院，资深显微镜应用专家，深蓝云生物ECHO显微镜产品经理，有多年显微镜实战经验和理论知识，对显微镜应用领域有深入的了解和独到见解。      扫描下方海报内二维码报名      

导读皮肤是我们与外部环境的第一个主要接口，是一个非常有吸引力的再生器官，在过去40年里，科学家们对它进行了大量的探索（Loai, 2019;Tarassoli, 2017）。皮肤组织模型的广泛应用领域，从药物筛选到化妆品测试和伤口愈合研究，部分原因是因为皮肤组织的组成相对简单，可以描述为两个主要层，每层都具有一种主要细胞类型。在过去已经建立了2D模型和培养系统。然而，这些模型并不能完全重述原生皮肤，也缺乏3D模型提供的空间组织(Loai,2019; Singh,2020;Vijayavenkataraman,2016)。为了增加物理相关性，提高体外结果与体内条件的可译性，迫切需要3D皮肤组织模型。仪器：CELLINK  BIOX墨水：GelXA Skin生物墨水和Col MA生物墨水细胞：人真皮成纤维细胞、表皮角质形成细胞过程：❶设计皮肤模型❷打印真皮层和表皮层❸3D生物打印皮肤组织模型转移到transwell板中，皮肤组织模型从液体培养到气液界面培养。结果：该皮肤组织模型的构建方法创建了一个完整且坚固的结构，可保持它在整个实验过程中的形状。样品横切面的H&E染色初步表明，6天时真皮和表皮这两个隔室之间的连接很弱。但在第14天，两层已经合并(图4)。在第14天，可以看到表皮平滑地跟随真皮的轮廓，真皮和角质形成细胞开始重组。进一步观察表皮发育，免疫荧光图像显示角蛋白14的表达在整个培养过程中保持不变，而角蛋白10和聚丝蛋白的表达在第14天增加。角蛋白10作为分化角质细胞的标记物，位于表皮的中间部分，而角化层的标记物聚丝蛋白应位于表皮的最外层。角蛋白10和聚丝蛋白表达的明显增加表明角质细胞已经开始分化。在第14天，聚丝蛋白的表达向结构的顶部，朝向气-液界面，显示了细胞在生物打印模型内的重组能力。总结：这项研究举例说明了如何使用原代细胞培养系统和CELLINK的3D生物打印平台进行全厚度皮肤组织模型的3D生物打印。★ GelXA SKIN生物墨水为皮肤发育提供了良好的环境，ColMA表皮生物墨水支持皮肤组织模型内表皮的形成。★ 该皮肤模型设计为表皮和真皮的发育形成了一个稳定的平台，在14天的培养期间保持稳定，但它可以培养更长时间，以允许其他真皮和表皮标记物进一步成熟。

导读霍乱弧菌是人类霍乱的病原体，霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高，属于国际检疫传染病。了解霍乱弧菌的复制原理能够帮助人们更系统的探索其感染机制。法国巴斯德研究所及华沙大学细菌遗传学系的科学家们在国际知名杂志Nucleic Acids Research上发表了一篇学术论文，揭示了霍乱弧菌的复制机制。（IF=16.971）应用亮点：▶  揭示了霍乱弧菌的两条染色体的复制协调机制。▶ 通过naica®微滴芯片式数字PCR系统对霍乱弧菌复制的关键调控基因进行定量检测并验证猜想。▶  该研究发现的霍乱弧菌复制机制可能存在于所有弧菌科物种中，对于其他弧菌复制研究具有参考意义。研究背景：霍乱弧菌是引起霍乱的病原菌，它由两条染色体（Chr1、Chr2）以精心编排的顺序进行复制。研究发现只有在Chr1上的crtS 位点复制后才会触发Chr2启动。本研究提供了关于 crtS 如何触发Chr2复制起始的新思路，对Chr1-Chr2复制协调机制进行了深入探讨。研究成果：❶、crtS（位于Chr1上，启动子结合位点）和39m位点（位于Chr2上，启动子结合位点）通过与启动子RctB竞争结合影响Chr2的复制，crtS的存在降低了RctB与39m的结合。▲crtS 能够抵消39m位点的抑制作用。Chr2复制起点 (ori2)和39m 位点的序列比对。RctB结合位点以绿色（iterons，启动子结合位点）和红色（39m）表示。❷、RctB分为4个结构阈，研究发现其通过相同的DNA结合域与crtS和39m相互作用。进一步研究表明RctB域IV对于ori2（Chr2）起始位点的39m和crtS调节都是不可或缺的，并且RctB域IV的C端对于crtS协调两条染色体的复制至关重要。基于该调控模型，文章使用naica®微滴芯片式数字PCR系统（Stilla Technologies）对霍乱弧菌中的（ori1 /ori2）和对照大肠杆菌中的（oriC / pORI2）进行定量，同时使用naica®多重数字RT-dPCR (Stilla Technologies) 对来自指数生长培养物 (OD600 0.4) 的霍乱弧菌中的 RctB mRNA 进行了定量并证实了上述猜想的正确性。▲B、 pORI2 相对于大肠杆菌菌株染色体的拷贝数 (CN)，通过在 rctB 中插入终止密码子构建各种 pORI2缺失表达载体。C、在有和没有染色体 crtS 位点 (+/- crtS)的情况下，大肠杆菌中 pORI2 拷贝数的比率。D、Chr2 在非复制型霍乱弧菌中相对于 Chr1 (ori2/ori1) 的拷贝数。在所有突变体中，crtS位点被敲除，RctB结合位点被插入 Chr1 的 attTn7 插入位点（平均值±标准偏差）。最后文章解释了霍乱弧菌的复制机制模型：▲crtS 协调 Chr1 和 Chr2 之间复制的模型。RctB 结合位点以绿色 (iterons)、红色 (39m) 和蓝色 (crtS) 显示。OFF = Chr1：crtS 未被复制。Chr2：与39m位点结合的RctB主要通过红色箭头所示来抑制ori2的复制起始。ON = Chr1：crtS 已复制。RctB与复制的crtS位点的瞬时结合导致与39m位点亲和力降低（蓝色箭头），从而释放ori2。RctB与甲基化iterons的结合导致DNA解旋元件 (DUE) 打开，RctB寡聚化到单链DNA上（绿色箭头）。期刊介绍：Nucleic Acids Research (NAR)：1974年创刊，由牛津大学出版社经过同行评审公开出版的科学期刊。期刊主要发布涉及核酸代谢和/或相互作用的核酸和蛋白质的物理，化学，生化和生物学方面的前沿研究结果。最新影响因子16.971。

导语在实验过程中，最心累的莫过于好不容易提取的核酸却降解了。那么核酸为什么会发生降解呢，我们又该如何预防呢？关于核酸降解，你了解多少呢？让我们一起对核酸降解一探究竟吧。   什么是核酸   核酸是一种高分子化合物，核苷酸是构成核酸的基本单位。核酸水解后得到许多核苷酸，核苷酸是组成核酸的基本单位，即组成核酸分子的单体。一个核苷酸分子是由一分子含氮的碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成的。根据五碳糖的不同可以将核苷酸分为脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。如果5-碳糖是核糖，则形成的聚合物是RNA；如果5-碳糖是脱氧核糖，则形成的聚合物是DNA。   核酸降解本质   核酸降解是DNA/RNA分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键，或磷酸二酯键在物理因素、化学因素和生物因素等作用下发生水解，使DNA/RNA链发生断裂。核苷磷酸化酶：能分解核苷生成含氨碱基和戊糖的磷酸酯酶。广泛存在于生物体内,催化的反应可逆。可在核苷水解酶作用下继续分解核苷成嘌呤碱、嘧啶碱和戊糖。核苷水解酶：主要存在于植物和微生物体内，只水解核糖核苷。   核酸降解原因   DNA降解的因素很多，主要分为物理因素，化学因素和生物因素。一、物理因素：温度，机械剪切力、核酸的反复冻融、高温煮沸及辐射等。二、化学因素：PH值，水解反应，氧化反应等。三、生物因素：酶解及微生物侵染等作用。一、物理因素的影响★ 温度：高温条件下，RNA不稳定，易加速磷酸二酯键的水解，使核酸降解；★ 机械剪切力：包括剧烈震荡、搅拌、细胞突然至于低渗溶液中，以及让溶液快速通过狭长的孔道；★ 核酸的反复冻融、高温煮沸及辐射等，均会导致核酸的降解。二、化学因素影响水解★ PH值：氢离子参与催化磷酸二酯键、糖苷键的水解，但糖苷键比磷酸二酯键更易被酸水解。过高或过低的PH值都易破坏复键。核酸(特别是RNA)在碱性溶液中十分容易降解；★ 氧化反应：会氧化碱基中的含氨杂环，使其变性，从而改变一级与二级的核酸构象；★ 苯酚在空气中被氧化生成醌，它能够产生自由基，直接用于DNA的分离，会使磷酸酯键断裂，造成DNA的降解。三、生物因素影响★  酶解：核酸酶可以催化水解多聚核苷酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构，使其降解。1.核酸酶(磷酸二酯酶)核酸内切酶：在环境或生物体内具有识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶统称为限制性核酸内切酶。作用方式从多聚核苷酸链中间开始，在某一个位点切断磷酸二酯键。如DNase，RNase等。核酸外切酶：核酸外切酶的作用方式是从多聚核苷酸链的一端(3'-端或5'-端)开始，逐个水解切除核苷酸。如蛇毒磷酸二酯酶，牛脾磷酸二酯酶等。2.核苷酸酶(磷酸单酯酶)专一性的磷酸单酯酶：3'-核苷酸酶，5'-核苷酸酶非专一性磷酸单酯酶。★  微生物侵染：微生物会将DNA作为营养物质或是其分泌的化学物质含酶。   预防降解的方法   预防RNA降解的方法:★ 去除环境中RNase酶的污染或强有力地抑制其活性。★ 获取样品后最好立即提取RNA，若无条件立即实验，应于-80℃液氮中保存样品，提取时取出样品后立即在低温下研磨裂解细胞，以防RNA降解。★ 在总RNA提取分离的最初阶段，联合使用Rnase的特异抑制剂，尽可能的灭活胞内的Rnase的活性。★ 避免样品的反复冻融。★ 保证裂解液的质量，裂解液的用量不足，也会导致RNA降解。★ RNA提取后，放入-80℃保存，防止降解。预防DNA降解的方法:★ 简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；★ 减少化学物质对DNA的降解，为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏；★ 防止基因组DNA的生物降解，主要是DNase降解基因组DNA，Dnase需要二价金属阳离子Mg2+等的激活，可用EDTA等金属离子整合剂整合Mg2+以抑制Dnase的活性；★ 减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力(如剧烈震荡、搅拌等)；★ 避免样品的反复冻融，可将DNA分装保存于缓存液中；★ 所有试剂应用无菌水配制，耗材经高温灭菌；★ 避免DNA的过高温处理等。

导读显微镜玻片做不好，哎呀，心痛！怎么办？实验技能小课堂开课了！！✨今天小编给大家总结了显微镜玻片的不同制作方法，希望能和大家一起渡过难关。   01涂片法   涂片材料有单细胞生物、小型藻类、血液、细菌培养液、动植物的疏松组织等。涂片时应注意：（1）载玻片要持平。（2）涂层须均匀且薄。（3）固定，可用化学固定剂或干燥法（细菌）固定。（4）染色，染色液要盖住全部涂面。（5）冲洗，用吸水纸吸干或烤干。（6）封片。   02压片法   将生物材料置于载玻片和盖片之间，施加一定压力，将组织细胞压散的一种制片方法，一般过程：（1）取材。（2）固定：取材后立即压片观察，可不作单独固定处理；取材后不立即视察，可将材料用固定液固定。（3）离析：对细胞团用水解分离液处理。（4）染色。（5）压片：将材料放在载玻片上，加一滴清水或染液，盖上盖玻片用拇指轻轻压片。（6）观察。   03切片法   观察机体各部的微细结构时常用，其中以石蜡切片最为常见。其制备程序大致如下:（1）取材与固定:取得新鲜材料后，切成适当的小块立即投入固定剂中进行固定。（2）脱水、透明与包埋:把固定好的材料的水分脱掉，经透明处理后，再浸入已融化的石蜡中进行浸透、包埋。（3）切片与染色:用切片机切成薄片，贴于载玻片上。脱蜡后进行染色。（4）封固:滴加中性树胶和盖片进行封固备用。    

▍导读将药物推向市场是一个竞争激烈，成本高昂且具有挑战性的过程，涉及临床前实验室和动物测试，然后才是耗时且昂贵的四个阶段的人体临床试验，这可能需要长达7年至15年的时间，价格高达55亿美元。即使10种可行的药物化合物被确定用于人体试验，9种中只有1种能够真正进入市场。鉴于如此高的损耗率，生物3D打印是否可以通过更好地识别可行的化合物来节省宝贵的时间和资源，并将最有希望的药物投入临床试验?✦动物实验的局限性✦在药物发现的最初阶段（通常被称为临床前试验），将监测新的化学实体（NCE），以确定化合物在目标系统内外的生命周期(药代动力学)和它们的化学反应（新陈代谢）。由于围绕人体试验的伦理问题及其高昂的成本，这些早期试验有相当一部分是在动物身上进行的。尽管由于采用了更好的研究工具，以及在目标识别中人工智能的兴起，从临床前动物测试向临床人体试验的过渡有所改善，但仍然存在真正需要改进临床前筛查的必要，因为动物测试通常无法表现人体新陈代谢的复杂性，会导致错误的阳性和阴性结果，从而不能准确反映药物对人体系统的毒性。✦3D细胞培养更有意义✦考虑到动物模型的局限性，科学家们转向人体器官模型也就不足为奇了。但是，尽管人类细胞已经在2D中进行了长期培养，近年来，范式的转变导致越来越多的科学家认识到在生物打印所支持的3D环境中使用人类细胞的重要性，以便产生更具生理相关性的模型。通过将生物3D打印中的细胞培养自动化与精心定制的生物材料（称为生物墨水）相结合，就可以在更短的时间内，以更大的数量培植、供给和维护人体器官模型，从而减少了在这些任务上花费的时间和精力。实验室机器人现在也可以选择和放置大量的细胞培养试剂或其他NCEs和液体样本，从而实现更高的通量筛选，并更有效地运行各种其他实验室任务。✦生物墨水更好地模仿ECM✦生物墨水是帮助研究人员推进药物发现研究的另一个强有力的工具。组织特异性生物墨水改善细胞粘附和分化，帮助形成人体类器官。还可以添加蛋白质和其他生物因子，以更准确地重建细胞外基质（ECM），再次更好地模拟体内微环境。此外，通过多种交联方法（化学，光，热），可以调节构建体的刚度以更好地服务于特定的细胞类型，例如软骨或骨组织。✦学习更多✦生物3D打印的人体器官模型可以在药物开发的初始阶段更有效地识别可行的化合物，节省制药行业的时间和金钱，将最有希望的化合物转移到昂贵的人体临床试验中， 该技术的影响力不断增长，意味着科学家们将继续验证越来越多的应用。

疫情当下，我们的工作和生活都受到了不同程度的影响。大家还是要以积极乐观的心态去做好每一个实验，过好每一天。但是你不是一个人在奋斗，深蓝云和你携手并进，共克时艰。在实验过程中可能会出现以下问题：仪器故障仪器操作不太熟悉不确定实验方案在仪器上是否可行……遇到这样的问题，来找深蓝云就可以了呀。足不出户，第一时间在线为您答疑解惑。线上云平台进行Demo演示和售后培训可以通过以下方式联系我们：1、致电010-57256059或138107300102、发送问题到下列邮箱：support@cycloudbio.com          dpcrsupport@cycloudbio.com           service@cycloudbio.com3、联系我们当地的服务中心北京深蓝云生物科技有限公司致力于为用户提供新型生命科学研究仪器和分析产品以及优化的整体应用解决方案，配备着专业的技术支持和应用支持，依托生命科学产品和解决方案，专注为用户提供分析产品和完善的售前咨询和售后服务。深蓝云国际领先的检测平台

导读在现代水产养殖中，水产养殖系统是为鱼类或其他物种的集约养殖而设计，其水质直接影响鱼类的健康和生产，而微生物在去除有机物和氮循环、有毒硫化氢(H2S)的产生方面发挥着至关重要的作用，微生物种类和数量会直接影响鱼类的健康，准确计数特定种类的细菌对控制潜在风险至关重要，尤其是那些对养殖鱼类及其最终消费者具有致病性的细菌。因此亟需高精度、高特异性、高敏感性且快速的方法，监测特定种类的细菌和数量。挪威海洋科技研究中心SINTEF Ocean科学家建立基于naica®微滴芯片数字PCR系统的多重数字PCR绝对定量评估鲑鱼三种关键病原体、人病原体单核增生李斯特菌、影响鲑鱼生存环境的硫酸盐还原菌(SRB)，用于水产养殖的相关优势细菌进行监测。该方法在发表于《Journal of Microbiological Methods》杂志上，题为“Absolute quantification of priority bacteria in aquaculture using digital PCR”。应用亮点：▶  使用naica®微滴芯片数字PCR系统直接绝对定量水产养殖系统中五种细菌。▶  开发同时定量水产养殖水质检测相关五种细菌的多重数字PCR检测方法。▶  基于naica®微滴芯片数字PCR检测方法具有灵敏度高、特异性高、耗时少的优势。科学家建立数字PCR方法监测与鲑鱼养殖生产过程中三类不同的细菌：第一类：鱼类病原体，与鱼类的溃疡性疾病有关的粘放线菌Moritella viscosa，会引起肠性红嘴病的鲁氏耶尔森菌Yersinia ruckeri以及与鱼类的细菌性冷水病有关的黄杆菌Flavobacterium psychrophilum。第二类：人类病原体，可以从海产品转移到消费者身上的人病原体，单核增生李斯特菌Listeria monocytogenes。第三类：破坏鱼类生长环境的细菌。通常硫酸盐还原细菌（SRB）在厌氧条件下通过将硫酸盐（SO42-）转化为有毒的硫化氢（H2S）来影响鱼类健康。可通过以脱硫弧菌Desulfovibrio desulfuricans为参考菌株进行SRB检测。研究学者利用naica®微滴芯片数字PCR系统的单重和多重检测方法对上述优势菌种进行绝对定量。结果表明粘放线菌Moritella viscosa，鲁氏耶尔森菌Yersinia ruckeri，黄杆菌Flavobacterium psychrophilum检出限低至20fg，李斯特菌Listeria monocytogenes和脱硫弧菌Desulfovibrio desulfuricans DNA检测含量可低至2fg，均具有更宽的线性范围，线性拟合度R2均在0.999以上（图1）。多重naica®微滴芯片数字PCR系统检测结果与单重分析中检测到的目标基因浓度吻合（图2，图3）。此次研究充分证明了naica®微滴芯片数字PCR系统可以同时精确定量复杂水质样品中多种类细菌。▲图1：naica®微滴芯片数字PCR系统定量5种细菌的线性回归图，分别给出相应的方程和回归系数。▲图2：对鲁氏耶尔森菌Yersinia ruckeri（A）黄杆菌Flavobacterium psychrophilum（B）的单、双重分析结果进行比较。在MMC-DNA背景(1 ng/μl)中添加鲁氏耶尔森菌Yersinia ruckeri ，黄杆菌Flavobacterium psychrophilum gDNA，10倍稀释后进行基因拷贝数定量。▲图3：在1 ng/μl MMC-DNA背景下，单重(圆形)和三重(三角形)测定的靶基因拷贝浓度绘制。恒等线表示每个点的X坐标和y坐标相等的位置。原文链接如下：http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/挪威海洋科技研究中心SINTEF Ocean为全球开展的海洋相关科学研究和创新，致力于海洋技术、生物标记和海洋环境技术研究。

微球体是在增殖过程中排列成球形的三维（3D）细胞培养物。1970年代就开始使用这项技术了，当时科学家观察到悬浮生长的仓鼠肺细胞以接近完美的球形形式排列。在二维单层细胞培养中，细胞与其生长的基质相互作用，而3D细胞培养可以长成球形，从而促进细胞间的连通性，并可以嵌入天然组织的细胞外基质（ECM）中。它们有助于更好地了解其微环境中的细胞，并为研究提供更现实的细胞方案。微球体研究在再生医学，癌症研究和药物筛选中特别有意义。间充质干细胞的球状体（骨髓中具有形成和修复骨骼组织能力的多能细胞）已显示出增强的组织再生和修复特性，并且移植后的生存期更长。在癌症研究中，将微球体用作多细胞肿瘤球体模型（MCTS），用以研究实体肿瘤生物学。MCTS内独特的细胞组成特别适合研究细胞如何生长，相互作用，增殖和吸收营养物质和化学化合物，这也使它们成为候选药物的理想临床前测试培养物。▍用于球体形成的3D生物打印自动化微球体研究最大的挑战是找到最合适的技术和工作流程，用以生成易于复制且尺寸均匀的球体。由于球体内的细胞功能与球体的大小密切相关，因此大小均匀性对于获得可重现的结果尤为重要。通过改善空间控制，减少人为错误，提高材料灵活性和提高速度，3D生物打印自动化可以实现更大程度的尺寸均匀性和可重复性。如今的生物打印机可以同时打印多种类型的细胞，并可以进行高精度液滴分配。高级的3D生物打印允许同时使用不同类型的生物材料，例如水凝胶，生物膜和颗粒。可扩展，具有成本效益的3D生物打印系统可以更快地进行大量打印，因此可以帮助研究实现高效率的进一步创新。但同样重要的是，3D生物打印使科学家能够开发标准的工作流程，避免耗时且重复的任务，并收集更一致的数据，以为微球体研究建立更好的预测模型。▍在您的实验室中创建微球体在微球体研究继续推动3D细胞培养向前发展的同时，在CELLINK，我们认识到需要简化这些细胞簇容易且可重复形成的工具。为此，我们为BIO X™配备了专用的喷墨打印模式，并开发了用于快速点胶的电磁墨滴打印头。我们通过Spheroid Kit等技术对BIO X 3d生物打印机进行补充，该技术包括适用于多种细胞类型的ULA板和生物墨水。

导读经过前面的几期学习，相信大家对显微镜的基础知识已经有了足够的了解，自信心提的满满的吆！接下来就可以根据实际需求来选择对应的显微镜了。让我们一起走进ECHO显微镜的世界，挑选一台属于你的显微镜吧。荧光电动显微镜—RevolveECHO显微镜颠覆了大家对显微镜的认知，是对传统显微镜设计的重新思考，是真正意义上的设计一体化和操控显示一体化，易学易用，使枯燥的实验变得简单有趣。高分辨率3D成像，获得最佳成像效果Revolve显微镜采用实时反卷积(DHR)，增加宽场荧光显微镜图像锐度，抑制噪声减少模糊，提高荧光检测分辨率。自动Z轴配合实时反卷积(DHR)功能，在保持高分辨率的同时，对较厚样本进行全景深扫描合成，实现3D高分辨成像。正倒置一体，一机两用Revolve显微镜既可以正置观察，也可以倒置观察，在正置和倒置之间自由转换。使用户不再因为样品的不同而分别购置正置和倒置两类显微镜，一机实现切片、培养皿、培养瓶和多孔板等多种样本类型的观察需求。在降低设备成本的同时，也节约了空间。试问：我还需要纠结选择买正置还是倒置吗，当然是都要喽。智能化操作，高效便捷Revolve显微镜采用自动荧光的方式，可以快速捕捉荧光信号，避免荧光淬灭。自动双相机系统保证了明场和荧光条件下都可以获得最好的观察效果。智能化的软件使操作变得更加简单。明场显微镜—Rebel随着Revolve的问世，ECHO显微镜的设计理念深受用户的喜欢，但是对于没有荧光需求的用户，一款正倒置兼备的Rebel足矣。自动细胞计数软件，无需特殊耗材Rebel为满足更多的用户需求，特别开发了自动细胞计数软件。区别于市场上的细胞自动计数仪，Rebel兼具显微镜与计数功能于一身。不再需要特殊的观察耗材，可使用玻片、培养皿、培养瓶等耗材进行细胞自动计数。高效便捷的网络共享方式Rebel还具有非常高效便捷的网络共享方式，通过WIFI、Internet等多种通讯方式，可以实现实时实验教学、病例分享和多人会诊。全电动显微镜—Revolution针对更高级别用户需求，ECHO又推出了Revolve进阶版Revolution，正倒置一体化设计，带来更多应用场景；双相机系统保证了确保效果最优；实时反卷积功能配合高速Z-stacking功能，提高荧光检测的分辨率。独特的触屏控制XY自动载物台功能，便于观察样品的定位；对于大样品扫描成像，电动载物台和Hyperscan功能结合,使扫描速度提升了一倍。对于活细胞的观察，活细胞工作站和多功能智能化联动，保证了活细胞长时间的观察。最后，我们一起来看一下ECHO显微镜下的微观世界吧。看到这样一台成像质量好，操作简单，适用范围广的显微镜，有没有心动呀，想不想体验一下操作极简，体验极佳的显微镜呀，想不想让我们珍贵的实验样本也有一个如此美轮美奂的瞬间，那就赶紧联系我们，申请试用吧，三款产品，总有一个适合你的吆！

导读上一期我们聊了下显微镜有哪些类型，又该如何去挑选适合自己的显微镜类型，但是同一类别显微镜也会有不同的配置，如相机、载物台、物镜、光源、聚光镜等等，一台显微镜由众多的硬件组成，而硬件又是显微镜性能的关键，因此我们搞懂应该买哪个类别的显微镜后，下一步我们就需要了解哪些硬件对我们的使用至关重要，让我们开始吧，Let’s go ~首先介绍的第一个关键硬件就是相机，这是我们成像的关键。在我们日常的认知中，我们看到的相机无论是手机还是照相机全是彩色的，给我们的感觉是相机只有彩色的，其实不是这样的，甚至和我们的直观感受相反，严格来说，所有的相机感光芯片都是不能识别颜色的，我们看到的那些彩色图片大多是通过拜耳滤色器来实现颜色的识别。就像上图一样，拜耳滤色器使用50％的绿色，25％的红色和25％的蓝色阵列，从而识别出颜色，但它会造成三分之二的光强损失，这对明场观察影响不大，但其他观察，如荧光观察，就可能产生较大的影响，因为荧光本身相对较弱。当然对荧光观察也有对应的解决方案，那就是在荧光显微镜中使用单色相机，这时候有用过荧光显微镜的小伙伴可能就会问了，可是我看到的都是有颜色的啊，这就要从荧光的原理和荧光显微镜的设计说起了。荧光是由特定波长的激发光激发，从而产生特定波长的发射光，也就是说，我们观察时是明确知道我们希望看到的光是什么，其他的光就只是干扰的杂光，因此荧光显微镜观察时选择将其他光滤掉，用单色相机进行成像，至于小伙伴们看到的彩色，其实是赋予的伪彩。 小伙伴了解了吧，明场观察需要选择彩色相机，而荧光观察需要选择单色相机，这样才能获得最好的观察效果。第二个要介绍的关键硬件就是调焦装置了，对于显微镜来说，调焦装置是决定显微镜档次的一个重要硬件，主要区别在于电动与非电动，非电动调焦，显微镜就只能实现XY轴观察，也就是平面观察，而如果实现了电动调焦，也就是配置了电动Z轴，就可以实现样品的XYZ轴观察，即3D立体的观察，显微镜的观察能力就提升了一个维度。第三个介绍的硬件是载物台，刚才说过无电动Z轴只能进行单平面的观察，单平面观察也是存在差异的，当我们需要对样品进行高精度的观察时，必然会选择更高的放大倍数，而这必然会导致视野的缩小，当我们需要拍摄整个样本时，只能依靠手动平移来实现全部观察和拍摄，后续进行拼接时难度极大，且极易出错，导致采用手动载物台难以实现高精度的大视野成像，而这就需要电动载物台来实现。这期就先介绍这么多，我们后期还会介绍显微镜的其他知识啊，小伙伴们持续关注哦。

导读自青霉素发现以来，抗生素已经成为人类对抗细菌的最有效武器，挽救了无数人的生命，但随着抗生素使用上的无节制，抗生素耐药性已成为一个重大的全球问题。因此了解微生物对抗生素适应的分子机制成为抗击抗生素耐药性（AMR）的一个重要途径。近日，法国巴斯德研究所的科学家运用转录组测序、naica®微滴芯片数字PCR等技术证实VchM（霍乱弧菌特有甲基转移酶）参与应对氨基糖苷类抗生素的应激反应，这表明，DNA甲基化在氨基糖苷类抗生素的耐药机制中也发挥着重要作用，该文章刊载于《PLOS GENETICS》。应用亮点：▶  运用naica®微滴芯片数字PCR系统分析霍乱弧菌操纵子表达情况。▶  VchM缺失会导致生长缺陷，但却可以使霍乱弧菌对氨基糖苷产生应激。▶  VchM直接调节groES-2（伴侣蛋白编码基因）的胞嘧啶甲基化，从而改变其表达情况，影响霍乱弧菌耐药性。氨基糖苷（AGs，如：妥布霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素和新霉素）是一类针对细菌核糖体小亚基的抗生素，其破坏翻译保真度，增加细胞中错误折叠蛋白质的水平。而本文的研究主要针对霍乱弧菌对其的耐药性机理。科学家们在之前的研究中发现，特定DNA甲基转移酶基因突变（VchM）的霍乱弧菌相比WT具有更强的耐药性，这表明DNA甲基化可能在霍乱弧菌适应AGs中发挥作用。VchM编码一种Orphan m5C DNA甲基转移酶，导致5‘-RCCGGY-3’基序的胞嘧啶甲基化，虽然VchM的缺失会导致生长缺陷，但霍乱弧菌细胞可以在亚致死浓度和致死浓度的抗生素下对氨基糖苷应激。▲图1：霍乱弧菌ΔVchM对亚致死浓度氨基糖苷的敏感性较低。GAs类，TOB（妥布霉素），0.6 μg/ml、GEN（庆大霉素），0.5 μg/ml、NEO（新霉素），2.0 μg/ml；非Gas类，CAM（氯霉素），0.4 μg/ml和CARB（β -内酰胺类西林），2.5 μg/ml对于ΔVchM霍乱弧菌的转录组测序和遗传分析发现，ΔVchM菌株中有4个直接参与蛋白质折叠的基因被上调。包括groEL-1，groEL-2，groES-1，groES-2。通过naica®微滴芯片数字PCR系统对基因表达进行验证分析发现，ΔVchM霍乱弧菌中groES-2的表达在不同时期均有较大上调。进一步通过缺失验证表明了groESL-2对ΔVchM的抗生素高耐受性的作用。▲图2：ΔVchM菌株中groESL-2操纵子上调(对数生长期，Exp, OD600 ≈ 0.3；指数生长期，Stat, OD600 ≈ 1.8–2.0)在groESL-2区域观察存在四个VchM甲基化基序存在。进一步对基序分析发现，破坏这些基序会导致groESL-2基因表达增加（如图3）。且基序破环越多，则导致的表达上调更加明显。同时，ΔVchM中的groESL-2基因表达一直高于基序突变，表明还存在其他因素与甲基化协同控制groESL-2表达。这些结果表明，在霍乱杆菌中，一组特定的伴侣蛋白编码基因受DNA胞嘧啶甲基化的控制，将DNA甲基化与伴侣蛋白表达的调节和对抗生素的耐受联系起来。▲图3：在WT中，groESL-2区域的VchM位点突变导致基因表达增加法国巴斯德研究所是世界上最著名的研究所之一，成立130余年来一直走在世界科技前沿，是微生物学、免疫学、传染病学等学科的起源地，曾开发出狂犬病疫苗、天花疫苗、流感疫苗、黄热病疫苗等多个造福人类的疫苗产品，并培养了10名诺贝尔奖生理学或医学奖获得者，实现研究、教育、健康、创新“四位一体”的研究机构。

背景介绍尽管在过去十年中，世界各地的癌症死亡率显著下降，但癌症仍然是全球第二大死亡原因，到2020年约有1000万人死于癌症。这一发人深思的统计数据使寻找更有效的癌症解决方案成为全世界研究人员的一个重要优先事项。虽然动物模型提高了我们对癌症及其进展相关分子机制的理解，但使用这些物种间模型开发的治疗方法经常在临床试验中失败，因为其疗效结果无法转化为人类使用。人体细胞治疗的体外测试（in vitro）为研究人员提供了一个新的方式，该方式可以加速发现问题，并避免晚期临床失败的高昂代价。但是，这种人类细胞的临床测试必须在3D而不是2D中进行，因为细胞在3D中会根据来自周围细胞和环境的外部信号进行自我组装。过去的研究表明，3D细胞培养支持更多相关的细胞间相互作用，并在细胞增殖、形态、氧化、药物和营养摄取、排泄和连接蛋白等方面表现出差异，为研究人员提供更多与生理学相关的模型，以研究疾病的进展或筛选药物化合物。 基于挤压的生物打印组织工程项目中的复合材料和多细胞的灵活性CELLINK屡获殊荣的基于挤压技术的生物打印机 BIO X™ 和 BIO X6™ 允许进行多达6个打印头的3D生物打印，在小型或大型组织工程项目中实现复合材料和多细胞的打印。 基于光的生物打印直接在组织模型内通过血管网络进行生物打印CELLINK还提供基于光的生物打印机，例如由Volumetric支持的LUMEN X™，它可以用作独立的组织制造系统，也可以与基于挤压的生物打印机结合使用。基于光的生物打印机的优势是高分辨率的图案以及直接在组织模型内通过血管网络进行生物打印的能力。 生物墨水优异的生物相容性，细胞活力和可打印性此外，CELLINK还提供最多种类的高质量生物墨水，以及针对特定细胞类型配制的组织特异性的预包装试剂盒。每个套件均包含组织特异性细胞，优质培养基和定制的油墨混合物，以实现低批次间差异性，出色的生物相容性，细胞活力和可印刷性。

小伙伴们，我又来了~本期给大家带来显微镜物镜的知识。啥是物镜，我想地球人都知道~物镜是显微镜的灵魂所在，物镜是影响清晰度的最重要部件，先来了解下物镜的重要参数。在选择物镜时需要考虑以下几个问题：1、需要多大的放大倍数？● 物镜可以根据其放大倍率分为三大类。其中包括：低倍物镜(2x、4x/5x和10x)，中倍物镜(20x、40x)和高倍物镜(60x/63x、100x)。除了物镜的放大倍率不同外，物镜使用的介质也不同。例如，对于高倍镜头(60x和100x)，经常使用浸油来获得高分辨率。放大倍率较低的镜头则采用空气作为介质。2、选择哪种观察方式？● 显微物镜有很多类型，应用场景也各有不同，根据观察方式的不同，也有不同种类。一般在物镜的外壳上会标注物镜的观察方式。● BF：明场；DF：暗场；PH：相差；PO：偏光；DIC：微分干涉；FL：荧光观察(蓝、绿、紫等)；UVFL：紫外荧光观察。3、如何选择一个成像效果好的物镜？● ①要选择有平场矫正功能的物镜，即标有Plan。 ②主要根据色差校正的能力来判断成像效果：消色差物镜（Achromatic）：仅能校正红蓝光的色差。半复消色差物镜（FL）：能校正红绿蓝三色光的色差。全复消色差物镜（Apo）：能对红绿蓝三色光的色差校正两次，同时能校正红、蓝两色光的球差。● 看透明切片可选择平场消色差物镜（Ach）。看荧光可选择半复消色差物镜（FL），而且有长工作距离可选，既可以看玻片也可以看培养皿。若需要更好的成像效果可选择全复消色差物镜（Apo），但Apo物镜没有长工作距离的，只适用于看玻片，不适合看培养皿或培养瓶等厚的样品。4、对分辨率的要求是什么？● 显微镜的分辨率是能分辨两点间的最小距离，能分辨的距离越小分辨率越高。数值孔径（NA值）与分辨率成正比，NA = n * sin α。与放大率成正比，与景深成反比。同样的放大倍数下，NA值越高越好。在工作距离都满足的情况下选择NA值高的物镜。5、需要多长的工作距离（WD）● 根据工作距离的不同，可以分为：①普通工作距离物镜：工作距离小，可以观察切片，但不能观察培养皿。②长工作距离物镜：用于倒置显微镜，可以满足组织、悬浮液等材料的镜检。6、所使用的玻片或培养板的厚度是多少？● 在标注物镜的光学类型的后面（∞/0）(210/0)，也就是斜杠后面这个数字代表的是适用玻片厚度，（∞/0.17）(210/0.17)，适用玻片厚度就是0.17毫米。如果用了不合适的盖玻片，则会出现很明显的球差（不同角度的光线没有会聚在同一高度）从而降低成像的对比度和分辨率。NA值越高的物镜对盖玻片厚度越敏感，所以要选择正规的盖玻片。有些高NA值的物镜以及长工作距离的物镜有可调的盖玻片厚度调节环可以对不同厚度的玻璃进行矫正，可用于培养皿的观察，观察时调节到相应的培养皿的厚度，或使用共聚焦培养皿，中间厚度也为0.17。

国家CDC在Diagnostic Microbiology and Infectious Disease发表了一篇文章，文中使用naica®微滴芯片数字PCR系统检测了不同时间段临床流感样本的病毒载量，来评估RNA完整性和样本采集质量及对监测系统中流感诊断的影响。.应用亮点：▶ 使用naica®微滴芯片数字PCR系统完成RNase P(RNP)RNA和流感基因的检测。▶  低病毒载量的流感样品（▶ 检测作为样本采集质量的关键指标RNase P(RNP)RNA，对于流感的预防和控制至关重要。流感监测对于流感的预防和控制至关重要。然而医院一般只进行流感抗原快速检测，核酸鉴定却在网络实验室进行。由于流感病毒作为一种RNA病毒，不如DNA病毒稳定。因此诊断目标区域的RNA稳定性和完整性是实验室检测的主要挑战，并且人们对冷藏临床标本中流感核酸的稳定性也知之甚少。本文采用先进的核酸定量技术--naica®微滴芯片数字PCR系统、用于对临床样本的RNA完整性进行系统评价，探索流感监测标本质量控制和评价的科学方法。通过实时RT-PCR检测的所有甲型或H1型流感阳性样本用数字RT-dPCR检测也呈阳性。图1清楚地显示了RNA随时间的降解。在甲型流感和H1流感测试中，RNA降解随着时间的推移不断扩大。在所有四个时间点通过数字RT-dPCR共检测了91个甲型流感病毒阳性样本的RNA含量和72个H1阳性样品的RNA含量，发现低病毒载量样本RNA降解比高病毒载量更显著且速度更快。在低病毒载量甲型流感样本测试中，第4组RNA降解率为75%至100%共有8个，其中有5个样本的RNA降解为检测不到（图1C）。在H1测试中，在第4组中75%至100%的RNA降解有9个低病毒载量样本，其中7个样本的RNA降解为检测不到（图1D）。▲图1.阳性样本的RNA随时间降解。(A)甲型流感阳性样本的RNA降解。(B) H1阳性样本的RNA降解。(C)低病毒载量甲型流感样本的RNA降解。(D)低病毒载量H1样本的RNA降解。(E)高病毒载量甲型流感样本的RNA降解。(F)高病毒载量 H1 样本的RNA降解。RNA降解=（第1组RNA含量-第n组RNA含量）/第1组RNA含量*100%。Y轴代表样本数。蓝色条表示0-25%之间的 RNA 降解，橙色条表示 25%-50%之间的RNA降解，灰色条表示50%-75%之间的RNA降解，黄色条表示 75%-100%之间的RNA降解。在研究中使用第1组RNP和流感RNA浓度参数比较样本采集质量。RNP值是样本采集质量的关键指标。样品质量采用 A-D 等级进行评估。图2表明，样本采集质量存在明显变化。图3比较了四家医院的样本质量。在甲型流感检测中，从M医院采集的样本质量最好，N、L、P医院采集的样本质量次之；在H1测试中，医院N采集的样本质量最好（图3）。▲图2：样本采集质量评估。(A)使用甲型流感和RNP参数评估样本采集质量。(B)使用H1和RNP参数评估样本采集质量。X轴代表流感A M基因(A)或H1 HA基因(B)的Log10 RNA浓度。Y轴代表RNP的Log10 RNA浓度。一个点代表一个样品的结果。红点代表M医院样本，黄点代表L医院样本，绿点代表N医院样本，蓝点代表P医院样本。样本质量分为A、B、C、D四个等级。▲图3：不同医院样本采集质量的比较。(A)不同医院甲型流感阳性样本采集质量的比较。(B)不同医院H1阳性样本采集质量比较。蓝条代表A级样本，绿条代表B级样本，红色条代表C级样本，黄色条代表D级样本。使用naica®微滴芯片数字PCR系统检测流感样本的病毒载量，研究RNA完整性和样本采集质量，提醒我们，应定期开展样本质量评估，以发现和改进医院样本采集中存在的问题。

我是Omicron，中文名奥密克戎病毒，来自南非的新变种，都听说了吧，如果你没听过我的名号，你可能就有点out了。图源：网络，侵删全球各地都有我的身影，国内呢，我正在香港、深圳、苏州等地晃悠，人类给我总结的特点就是快，传播快呀~图源：网络，侵删听说新冠自2019年末被发现至今已累计感染超4亿人，新冠达到1亿确诊时是在2021年1月，之后只用了7个月就达到2亿，而翻倍达到4亿则只用了6个月，特别是3亿到4亿只用了1个多月的时间。这主要归因于我奥密克戎变异株的高传染性和快速传播性。图源：网络，侵删根据新冠病毒数据库GISAID目前共享的信息显示，我奥密克戎变异株的突变位点数量明显多于近2年流行的所有新冠病毒变异株，而最近的感染分析发现，奥密克戎毒株现有感染中也出现了进一步变异的分支亚型，带R346K变异的BA.1和BA.2。BA.1+ R346K亚型占现今全球奥密克戎序列的约40%，在新西兰、英国和美国这一比例则为35-60%。BA.2亚型占全球奥密克戎序列的约10%，其流行率正在上升，并且在丹麦、印度和南非已占主导地位。我和之前的新冠病毒相比已经改变得面目全非。图源：网络，侵删通过人们的研究，对不同分支亚型的治疗分析发现，同属奥密克戎的不同亚型对不同中和抗体的反应也并不相同。谢晓亮团队在《nature》的文章表明，奥密克戎RBD上的单个突变会影响不同类别抗体的有效性（该文章筛选了247种人类抗体，且将其分为6类）。例如，奥密克戎可利用突变K417N、G446S、E484A和Q439R逃逸A类至D类的抗体，这些抗体的表位与ACE2结合基序有重叠。Davide Corti团队在《nature》发表的文章也表明奥密克戎免疫逃逸能力或强于之前新冠病毒谱系，研究中测试的8种治疗性单克隆抗体中，大部分完全失去了对奥密克戎的中和活性，扩大筛选范围后，入选的36种中和抗体，只有6种对奥密克戎依然具有强效的中和活性，而在29种靶向RBD特定区域（受体结合基序）的单克隆抗体中，有26种对奥密克戎的中和活性出现了显著下降。这些结果都提示我们，未来对新冠病毒的分型将是一个非常重要的工作，不但会影响我们的疫情防控工作，也会影响到我们针对新冠肺炎治疗药物的研发和不同患者的针对性治疗。我的秘密被暴露了，好像找到了方法对付我。图源：网络，侵删让我看看是啥方法~原来是naica®微滴芯片数字PCR一次快速鉴别Omicron新冠病毒变异株刺突（Spike）蛋白6个突变位点，并实现绝对定量，获得鉴定和监控。应用亮点：▶  6个核心突变位点快速检测。▶ 可视化微滴溯源单个阳性微滴，确保结果真实可靠。▶  阳性微滴定性分析，同时给出定值，便于监测监控。(翻译成中国话就是：检测位点多、灵敏、还能监控我~）方法描述：试剂：Omicron（奥密克戎）新冠病毒变异株鉴定试剂盒（珠海辉睿公司）仪器：naica®微滴芯片数字PCR系统（北京深蓝云生物科技有限公司）数据分析：数字PCR通过阳性微滴直接判读阳性结果。▲ 图1：阈值判读直观阳性位点扩增明确这样奥密克戎很容易就分型了。图源：网络，侵删新冠病毒已在全球肆虐了2年多的时间，且仍处于不断变异过程中，随着人们对其认识更加深入，人们对其危害的认知也越来越清晰，各种后遗症的发现，各种新出现亚型不断挑战疫苗和治疗手段组成的防线。我们是否应该针对病毒不同亚型展开更有针对性的治疗方案研究？我们是否应该针对病毒不同亚型的感染特点采取更加有效的防控措施？我们是否应该针对感染进行更精细化，更个人化的分析和治疗？

最近，人们发现新冠病毒SARS-CoV-2有可能在母婴之间进行垂直传播，而这种传播的后果，无论是胎儿还是新生儿，均尚不清楚。来自法国艾克斯-马赛大学的科学家在《Clinical Infectious Diseases》杂志上发表了一篇名为Congenital Infection of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 With Intrauterine Fetal Death: A Clinicopathological Study With Molecular Analysis 的文章，该文章是关于SARS-CoV- 2因母胎传播而继发胎死腹中并伴有先天性感染，胎盘和胎儿组织损伤的第一篇报道。文中采取个案研究的方式，来自于一个SARS-CoV-2孕中期先天性感染的病例。一名孕妇在SARS-CoV-2检测呈阳性后入院观察。随后检测到胎儿只有少量运动，羊水正常，胎盘形态正常。第二天，患者出现失血，胎儿运动减少。在超声检查中未发现胎儿心脏活动。在引产后，这对夫妇提出并同意了胎儿和胎盘的病理学检查。后续采用免疫化学，RT-qPCR和RT-dPCR对胎儿和胎盘进行病理学检查和SARS-CoV-2基因组变异分析。为了提高SARS-CoV-2基因组检测的灵敏度，文中作者采用naica®微滴芯片数字PCR系统进行检测。在SARS-CoV-2病毒RNA的3个特异性区域设计引物和双标记探针：NI和N2为N基因，IP2为RdRP基因。均在FAM通道中检测荧光信号，可以提高检测的敏感性和特异性，在HEX通道中测量的人类基因被用作内部控制来验证样本的存在。▲利用RT-dPCR技术，从阳性对照(PAC)、固定肺组织和胎盘检测SARS-CoV-2病毒载量的2D微滴图。(A)HEX通道的阳性微滴检测内源性细胞。(B)FAM通道检测3个SARS-CoV-2靶点。(C)在FAM通道和HEX通道均可以检测到内源性细胞和SARS-CoV-2靶点。(D)阴性微滴通过临床病理学和分子水平的综合分析，结果表明：胎盘发生组织学病变，出现组织细胞间炎症和滋养层细胞坏死。胎儿表现出轻微的生长限制，出现肝细胞损伤和含铁血黄素沉着症，在胎儿组织中没有发现炎症细胞，在福尔马林固定胎盘、冷冻胎盘标本和胎儿肺和肝样品中均检测到SARS-CoV-2，在福尔马林固定胎盘组织中检测到最高的病毒载量。本案例中，SARS-CoV-2孕中期先天性感染，伴有子宫内胎儿死亡，继发于SARS-CoV-2感染的极度弥漫性胎盘损伤特征。母胎交换严重受损，导致胎儿缺氧伴心力衰竭和胎盘组织中高水平的病毒RNA。因此，在疑似SARS-CoV-2垂直传播的病例中，应考虑对孕妇进行产科急诊管理，特别是存在血小板减少症导致胎儿移动减少的情况下。原文链接：https://doi.org/10.1093/cid/ciab840

自动化3D细胞培养、简化BIO CELLXCELLINK最新推出的自动化3D细胞生物学流程可促进肿瘤研究与药物研发的进展。▍升级自动化高通量、全自动的生物分配解决方案利用BIOPOD（按需生物打印）技术和预先设定和预先验证的协议，将 3D 细胞生物学的力量带到您的工作台上。▍易于操作该平台利用 BIOPOD 技术，将最先进的仪器与预先验证的内置协议和材料混合盒相结合，提供比市场上任何其他系统更易于使用的解决方案：即插即用-play用户体验。▍无细胞沉淀只需按一下按钮，墨盒就可以自动将细胞与水凝胶混合均匀。这种新方法可确保高细胞活力并自动中和胶原蛋白。▍轻松挤出水凝胶三个墨盒站中的每一个都提供从 0°C 到 60°C 的精确温度控制，可以轻松打印 ECM 水凝胶和胶原蛋白、GelMA 和 GelXA 等生物墨水。▍精确且可重复无论分配的材料如何，高精度正位移挤出系统每次都能提供可重复的结果。▍预先验证的协议，易于使用由科学家，为科学家使用预先验证的协议可以让您轻松制作 3D 细胞模型。预加载的详细计划涵盖从构造几何形状到生物材料选择再到分配设置的所有内容。此外，每个协议都包含上游和下游分析的分步说明，因此在您过渡到 3D 细胞培养时，您的工作流程中没有瓶颈。从系统上预加载的协议或作为基于云的更新提供的不断增长的协议数据库中进行选择。

前言当我们进行细胞实验的时候，很多时候都会对培养或者消化细胞的数量进行计算，最常规的就是细胞计数了。原始的细胞计数方法是通过对细胞进行染色，在显微镜下人工观察细胞状态判断细胞死活，进行计数。显微观察是细胞计数的基本原理，但是人工细胞计数是一件非常耗时耗力的工作，特别是要面对大量样本的计数需求时，因此就衍生出了细胞计数仪。我们常见的细胞计数仪是这样的：图源：网络，侵删这些自动细胞计数仪的原理又是怎样的呢？它们的底层原理是这样的：图源：网络，侵删其实自动细胞计数仪就是一个简化版的显微镜，然后搭载了对图片进行识别的软件功能，从而实现对细胞的计数。既然自动细胞计数仪可以做到，那么专业显微镜一定可以做得更好。Echo Rebel和传统的细胞计数仪不同，其具有极高的普适性，无需细胞计数仪的专用耗材，无论载玻片还是培养皿都可以进行计数。Echo Rebel的细胞计数仪是这样的：还可以是这样的：与传统的细胞计数仪相比，Echo Rebel细胞计数采用嵌入式设计，与显微镜完美融合，细胞计数时间短，普适性高，无需专用耗材，使用和维护成本低。你以为这就结束了，不，我们还可以这样：

关于实时荧光定量PCR技术，最常见的应用是通过RT-qPCR进行基因表达分析、疾病诊断和管理（如病毒定量）、食品检测（如转基因或过敏原分析）以及动物或植物育种等研究。这种方法非常灵敏，因此为了得到可靠的实验数据，避免错误是十分重要的。RT和qPCR数据评估的整个工作流程包括以下几点：1、实验设计2、样品的制备和提取/纯化3、RT和qPCR4、数据评估在以上过程中，实验人员有可能因为操作错误或失误导致实验数据的失真。但往往有些错误的来源又十分不明确，所以排除故障的第一步是需要再次检查实验流程并重复实验。实验设计RT或qPCR反应的第一个重要步骤是测定PCR产物及验证相应的引物和探针。实时RT-qPCR引物和探针最有效的设计是使用引物设计软件，大多数软件都可以调整设置参数的最佳属性，以检索到符合要求的引物探针序列。这些设置参数考虑熔化温度Tm、互补性、二级结构以及扩增子大小和其他重要因素。同时建议跨内含子设计引物，避免来自gDNA的干扰，直接得到cDNA片段。对于基因特异性引物的设计，应满足以下标准：扩增子大小: 75-200 bp引物长度: 18-30 bpGC 含量: 40-60%解链温度: 55-60℃3' 端: 1-2 G or C，以具有良好的稳定性不超过3个G or C （可能不匹配）没有二级结构，重复序列或回文结构浓度: 150-200 nM样品的制备和提取/纯化模板的质量直接影响到检测性能，在qPCR结果的故障排除过程中也需要考虑。首先，组织取样和保存是实验可变性的第一个潜在来源。对于基因的定量，必须使用高质量的RNA，这意味着需要非常仔细地检查RNA的浓度和质量。降解或不纯的RNA会限制逆转录反应的效率，降低产量；部分降解的RNA可能不能给出准确的基因表达结果。核酸应从新鲜或立即冷冻的组织中提取和纯化；同时建议使用生物学重复（至少3个）。RNA或DNA的分离是PCR实验前的关键步骤。这是必要的，以便提取对所有样本都是有效的，并得到纯化的核酸（DNA，RNA）。可采用高分辨率琼脂糖凝胶检测核酸质量和分光光度法（A260/A280=1.8和A260/A230=2.0）检测核酸纯度。关于核酸的质控可查看以下两篇文章以供参考：▲ 点击图片即可查阅原文另外也要注意，用于PCR制备的工作空间所有台面及物品都应进行常规去污，以防止交叉污染。逆转录和实时荧光定量PCRRT-qPCR是一种分析DNA或RNA的高灵敏性工具。当PCR扩增靶标时，错误同时被放大。可以通过标准化和尽量减少移液步骤来减少PCR反应中的技术错误；在无灰尘的干净环境中建立反应；通过对无模板（水）对照进行PCR反应，常规检查引物和试剂库存的DNA污染等。在进行qPCR时可能会出现以下故障：没有扩增、qPCR效率多大或过小、Cq值过大、重复性差、扩增曲线异常、非特异性扩增等等。遇到这些问题应该怎么解决呢，查看以下文章，问题迎刃而解：▲ 点击图片即可查阅原文运行后的数据分析-基线和阈值的设置基线校正是去除背景荧光的必要条件。可能的原因是qPCR设备的检测器噪音，或是不同的样品量或染料（探针或插入染料）的残留荧光。所有样本的基线起点一般从0~3个循环开始进行量化，基线终点是在各个扩增曲线起峰位置前的1~2个循环。为了使实时RT-qPCR数据有意义，应在扩增曲线的指数扩增阶段设置阈值，阈值自动设置一般是基线期荧光信号标准偏差的10倍。Cielo™实时荧光定量PCR系统Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。

使用序列特异性的CAS内切酶进行精确性敲除，敲入，替换等已成为一种常用的分子生物学手段。但是，为了识别所需的基因修饰，排除脱靶克隆，仍然需要筛选几百个单克隆细胞系。而大量克隆的维护和筛选是一个费力、耗时、容易出错的过程。欧洲分子生物学实验室（EMBL）研究人员Moritz Kueblbeck, Andrea Callegari等分享了一种快速验证基因编辑效果的实验方案。该方案使用naica®微滴芯片数字PCR系统（Crystal Digital PCR™）实现了一次三色分析就可完成目标拷贝数的评估和脱靶事件的检测。且基于数字PCR (dPCR)的高敏感性，无需大量的样品，因此，在早期就可以完成筛选试验。Crystal Digital PCR™一次实验3个小时内就可完成，对于编辑错误的克隆当天就可终止培养。那么这个实验具体是怎么设计的？就让我们一起来看看吧。应用亮点：▶ naica®微滴芯片数字PCR系统一次三色分析同时完成目标拷贝数的评估和脱靶事件的检测，是非常强大的绝对定量工具。▶ naica®微滴芯片数字PCR系统对长插入片段(如mEGFP)拷贝数提供稳健的检测方法。▶ naica®微滴芯片数字PCR系统只需少量生物样本，可以在早期完成检测，快速完成CRISPR筛选，节省时间。Single-step 3-color Crystal Digital PCR™实验设计：该实验共设计了三个探针：1.“total tag”（HEX基团标记）检测mEGFP转基因；2.“on-target tag”（FAM基团标记）检测内源NUP93编辑位点的最后一个外显子与整合的mEGFP转基因(标签)的5'序列之间的连接；3.reference(CY5基团标记)作为内参，对“total tag”和“on-target tag”进行归一化。“total tag”归一化获得整合的mEGFP拷贝数和“on-target tag”获得靶标上整合的mEGFP拷贝数。实验使用U-2 OS细胞作为基因编辑对象，其具有3个NUP93等位基因。结果分析：如图B所示，对多个U-2 OS细胞系的基因编辑效果进行分析，naica®微滴芯片式数字PCR系统结果显示克隆35，52和247的U-2 OS细胞mEGFP总拷贝数和靶标拷贝数都为3，这表明这三个细胞系的所有3个NUP93等位基因都成功编辑，没有脱靶，这个结果与检测金标准的Southern blot的结果一致（图C），而克隆5虽然mEGFP总拷贝数和靶标拷贝数一致，但与NUP93位点的预期数量不匹配。这表明其可能发生基因组的重排，而Southern blot结果也验证了这一现象，其出现了一个小于正常NUP93的拷贝条带。对于克隆25和246，虽然其靶标拷贝数符合预期，但是其总拷贝数大于3，这表明其可能存在脱靶整合或者不完全HDR（homology-directed repair）现象，而Southern blot结果显示其存在一个过大的整合条带，表示其可能存在基因重排。上述这些结果表明基于naica®微滴芯片式数字PCR系统（3-color Crystal Digital PCR™）的基因编辑脱靶检测的三色数字PCR检测方法，是一种快速简便的一步检测方法，其结果与耗时更长的Southern blot技术完全一致，可以用来快速评估基因编辑效果，筛选适合的基因编辑细胞株系。

2022年的春节已接近尾声，科研的小伙伴已经开始忙碌起来了，对于新学期是不是也有新的计划，发一篇sci的文章顺利毕业，脱单flag，头发多一点点，细胞养好，科研项目进展顺利，老师能给买台心仪已久的显微镜；你想知道选择什么种类的显微镜，正置还是倒置，宽场显微镜、超高分辨率显微镜、激光共焦显微镜等等，小本本备好，我们开始了。1不同成像原理，不同分辨率的显微镜如何选择显微镜作为生命科学领域研究的必须工具，其结构复杂，配置繁多，根据不同的配置和结构，相应的价格有很大的差异。那很多用户在实际采购过程中，看到长串的配置不知如何去选择，怎么用合理的价格去买到一个完全能够满足自己实验需求的显微镜呢？从今天这期推文开始，将会着重介绍选择显微镜的几个关键核心问题，目的是让用户能够在自己的预算范围内选择出符合自己实验需求的显微镜。首先要知道显微镜从开始诞生发展到现在，主要通过分辨率来划分，分为宽场显微镜、超高分辨率显微镜、激光共焦显微镜以及电镜。这一系列显微镜的分辨率从光镜的200纳米到超高与共聚焦的100多到几十纳米再到电镜的0.2纳米。并不是说显微镜的分辨率越高，就越适合我们的研究。分辨率越高，意味着其价格和操作的难度系数是逐级增长的。那我们如何去选择一个适合我们的显微镜呢？要根据老师和用户自己样品的大小去选择。2不同机型的选择我们在根据样品的大小和观察的实验需求，确定了某一类型的显微镜之后。我们需要根据实验样品去选择相对应的合适机型。显微镜的主要机型，根据其光路设计的不同，主要分为体视显微镜、正置显微镜和倒置显微镜。体视显微镜：体视显微镜，是一种具有正像立体感的显微镜，被广泛应用于材料宏观表面观察、失效分析、断口分析等工业领域。以及生物学、医学、农林、工业及海洋生物各部门。因为体视显微镜的光路设计，符合人体眼睛夹角的偏角，所以通过体视显微镜观察物体时，类似于我们眼睛的成像光路，这样会让我们看到立体的图像呈现。正是由于此设计，体视显微镜的分辨率要远低于传统的正置或倒置显微镜。体视显微镜更多的是观察小物体的宏观表象，而不是更为精细的细节。正置显微镜：正置显微镜作为最早诞生的机型它更多的是要配合玻片来对样品实现显微观察。如何来定义正置显微镜呢？显微镜物镜朝下，观察的样品在物镜的下方，这样的显微镜我们称之为正置显微镜。一般适用于的观察样品为：透明样品、薄的样片、生物切片、涂片等。但由于正置显微镜的机械设计，样品位于载物台与物镜中间。低倍物镜齐焦时，与载物台之间的距离大约为三厘米左右。像无法切割的厚样品，类似矿石、零件或者是在孔板、培养皿、培养瓶中培养的细胞，就无法在正置显微镜下进行观察，那由此人们设计了倒置显微镜。倒置显微镜：顾名思义，倒置显微镜与正置显微镜正好相反，那么定义也是相反的，物镜朝上，要观察的样品在物镜的上方，此类显微镜我们称之为倒置显微镜。我们可以看到倒置显微镜，物镜和载物台之间不再放观察的样品，样品是放于载物台的上面，所以样品的厚度就不会受到载物台与物镜之间距离的限制。因此倒置显微镜主要用于微生物、细胞、细菌、组织培养、悬浮体、沉淀物等的观察。介绍了三种不同形式的显微镜，相信我们的老师和用户对自己的样品适用于什么类型的显微镜已经有了一个大体的判断。当我们更多的去观察样品的立体结构，对细节和分辨率没有更高追求的时候，我们通常会选择体视显微镜。当我们的样品无法制成玻片或者不能放在玻片上时，我们就去选择倒置显微镜。如果能制成玻片就选择正置。为什么说能制成玻片就去选择正置呢？因为对于倒置显微镜来说，正置显微镜的高倍数观察更方便，比如60X和100X的油镜。同时，因为它的光路要比倒置更短，搭配高分辨率聚光器后分辨率更高，对比度更好。通过我们这期推文的介绍，老师对于选择哪种分辨率水平的显微镜，以及什么类型的显微镜会有一个较为清楚的了解。这些只是我们采购或选择显微镜的第一步，就是我们确定显微镜的类型。针对不同的观察样品，又会有其更为适应的观察方式，又有不同的光源，不同品质的物镜，供我们去选择。欲知后事如何，且听下回分解。｜申请试用｜ECHO 显微镜可以申请试用哦！关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

在非小细胞肺癌(NSCLC)靶向治疗过程中，有可能会出现获得性耐药的问题。虽然目前已经发现了许多获得性耐药的驱动因素，但在治疗过程中导致肿瘤进化的潜在分子机制还不完全了解，治疗在多大程度上通过促进突变过程积极推动肿瘤的发展尚不明确。因此来自美国马萨诸塞州总医院的Hideko Isozaki和Ammal Abbasi等科学家发表了一篇名为《APOBEC3A drives acquired resistance to targeted therapies in non-small cell lung cancer》的文章，文中作者研究了在NSCLC靶向治疗期间，是否有特定的突变机制驱动肺癌的基因组进化。结果表明靶向治疗诱导胞苷脱氨酶APOBEC3A (A3A)突变可能促进非小细胞肺癌获得性耐药的发展。作者在研究中发现，临床常用的肺癌靶向治疗诱导A3A的表达，导致耐药癌细胞持续发生突变。诱导A3A可以促进了药物治疗细胞中双链DNA断裂(DSBs) 的形成，从而导致耐药细胞进化过程中的染色体不稳定性，如拷贝数改变和结构变异。通过基因缺失或RNAi介导的抑制来预防治疗诱导的A3A突变可以延缓耐药的出现。因此，靶向治疗诱导A3A突变可能促进非小细胞肺癌获得性耐药的发展。抑制A3A的表达或酶活性可能是一种潜在的治疗策略，以预防或延迟获得性耐药的肺癌靶向治疗。因此靶向治疗诱导A3A突变可能促进非小细胞肺癌获得性耐药的发展。抑制A3A的表达或酶活性可能是一种潜在的治疗策略，以预防或延迟获得性耐药的肺癌靶向治疗。在DNA双链损伤形成时,H2AX的Ser139 位点会被迅速磷酸化,从而形成γH2AX，γH2AX可以作为双链修复的标志物。文章中作者通过免疫荧光技术，利用ECHO Revolve正倒置一体荧光显微镜进行免疫荧光观察。在奥希替尼治疗2周后，我们观察到PC9细胞中组蛋白变体H2AX的Ser139磷酸化水平升高（图1），说明TKI诱导的A3A突变导致基因组不稳定，促进耐药克隆的进化。将γH2AX映射到TKI处理的PC9细胞的细胞周期分布上显示，γH2AX最显著地定位于一个恢复细胞分裂并处于G2期的细胞亚群（图2），因此，TKI治疗诱导增殖耐药细胞中A3A催化的基因组损伤。▲图1：用1 μM奥希替尼处理PC9细胞0或14天，用γH2AX染色以量化DNA损伤。NT，没有处理；比例尺= 70μm。▲图2：左图是用1 μM奥希替尼处理PC9细胞14天，用EdU/DAPI染色以分辨细胞周期，代表G1、S、G2细胞;比例尺= 10 μm。右图是EdU细胞周期试验的散点图，用γH2AX定量DNA损伤。NT：未处理。作者的研究结果表明，TKI治疗后APOBEC突变信号的获取可能指示了耐药克隆的进化路径，并提供了一种新的机制，通过该机制，靶向治疗可能在治疗期间无意中增加了癌细胞的适应性突变。因此，阻止A3A的表达或酶活性可能是一种潜在的治疗策略，以预防或延迟获得性耐药的肺癌靶向治疗。参考文献：H Isozaki, Abbasi A , Nikpour N , et al. APOBEC3A drives acquired resistance to targeted therapies in non-small cell lung cancer. 2021.DOI:10.1101/2021.01.20.426852Revolve Gen 2正倒置一体电动荧光显微镜新一代Revolve正倒置一体电动荧光显微镜，拥有流行的触屏操控方式，配备智能荧光成像系统，将Z-Stacking全景深成像和DHR数字处理功能有机联合，提升分辨率告别照片模糊，为您打造全新的成像体验。

细胞培养在各位研究生的日常实验中占据了相当多的时间，你的细胞如果有幸养的很好，真是你好我好大家好，实验事半功倍；细胞培养差的学生，说多了都是泪，自挂东南枝了，一把鼻涕一把泪。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用的技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等，那下面进入正题，分享一下细胞培养的秘籍。以动物细胞为例，动物细胞培养需要的一些特殊条件。① 加胎牛血清培养基：动物细胞离体培养常常需要血清。各种细胞合成培养基（如MEM、RPMll640、DMEM）只提供细胞生长所需的各种基础营养物质，包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、维生素等。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。根据不同细胞的需求，一般含有10%～20%的血清培养基即可维持细胞较快的生长增殖速度。② 无菌环境：无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。使用的各种试剂和耗材要经过高压或紫外线灭菌。严格的无菌操作是养好细胞的必要前提。为防止细胞受到微生物感染，可在培养基中加入双抗。③ 温度和气体环境：一般动物细胞在体外培养的适宜温度是37℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长甚至死亡。二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，一般维持在5%。二氧化碳既是细胞的代谢产物，又与维持培养液的pH密切相关。如何防控污染：保持良好的操作习惯，超净台要紫外灭菌30min，以70%的乙醇擦拭无菌操作台，开启超净台风扇运转数分钟后，才开始实验。每次只处理一种细胞，以免失误混淆或细胞间污染，操作不要触碰吸管尖头部或容器口等。像对待孩子一样养细胞，它很脆弱，最好每天关注一下，以免出现培养箱缺二氧化碳，停电、温度不够等现象。避免全军覆没，好细胞要及时保存，有备用的细胞，这样即使有细胞污染还可以有备用的细胞顶上，不至于太恼火，好习惯要保持。不同细胞喜好不同，需要在培养中慢慢体会，例如平滑肌细胞比较好长，2-3天可能就会有很多细胞，应该算是比较好养活的；内皮细胞分泌物较多，需要时不时换洗才会长的好等等。培养好的细胞会被安排不同的实验，有的看趋势、有的看状态、有的看蛋白表达，有的看共定位，最终它们都会和显微镜打交道，那我们就聊聊显微镜和细胞的不解之缘。根据不同的细胞实验需求，使用的显微镜也不尽相同：Echo Rebel数字化显微镜，具备明场、相差观察方式和正倒置一体特点。可以观察培养瓶、孔板和培养皿里面的细胞形态，根据细胞状态，您可以及时调整实验条件。同时Echo Rebel数字化显微镜具有自动细胞计数和测量等功能，可以用来细胞计数和做细胞划痕实验，如果您的细胞不涉及到荧光实验，Echo Rebel数字化显微镜基本可以满足你的需求。▲ 成骨细胞▲ 细胞计数Echo Revolve Gen2荧光显微镜具有自动荧光系统可以做到开机即用，一键荧光系统切换，搭配的DHR和Z-Stack功能可以使细胞成像更清晰。即可以做到明场观察细胞形态，同时也可以做GFP蛋白转染的细胞实验。Echo Revolve Gen2荧光显微镜还可以用来检测是否转染进细胞。DHR和Z-Stack的搭配可以更清楚的研究细胞内蛋白分布表达情况等。Echo Revolution自动化显微成像系统具备Revolve的所有功能并在此基础上升级，使之专为活细胞观察而生。HyperScan高速拼接大视野成像功能，即可以快速扫描整个样品孔又能解决高倍镜下视野小的问题，可以更清晰和整体的观察细胞形态。延时摄影成像功能（TimeLapse）结合自动对焦与长时间锁焦，再搭配活细胞工作站和全自动载物台，可以实现活细胞长时间观察，从而研究细胞的生长和发育过程，对研究干细胞诱导分化成器官的整个过程具有重要意义。而孔板导航成像功能（Multi-well Point）可以对不同孔位进行自定义扫描和观察，研究不同实验条件对活细胞的影响。培养细胞需要耐心及不断的积累和摸索，了解它们，呵护它们，相信这个小小的细胞会成长的很好。小编就先介绍到这里，我们的显微镜可以申请试用哦，请拨打电话010-57256059联系我们。

什么是多重PCR？多重PCR(multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR)也称复合PCR，它是在同一PCR反应体系中加入一对以上引物，各对引物分别结合在模板相对应位置，最终扩增出一条以上目的DNA片段(图1)，其反应原理、反应试剂和操作过程与一般PCR相同。▲ 图1:多重PCR反应示意图（图源网络，侵删）荧光定量PCR可以实现多重PCR吗？当然是可以的，荧光定量PCR除了常规的单基因定量外，也是可以实现多个基因的同时检测。单基因检测我们一般使用染料法，通过染料分子与双链DNA的结合来进行PCR反应的实时监测，但是这种结合是非特异的，我们无法区分同一个PCR反应体系中的多个目的DNA片段，因此需要采用另一种方式来同时进行多基因的检测，也就是探针法。▲ 图2:染料法和探针法的检测原理（图源网络，侵删）探针法通过与模板特异性结合的探针解决了特异性的问题，同时不同的探针可以标记不同的荧光基团，通过对不同探针之间的识别，从而实现对多个基因的同时检测和定量。但是这又带来一个问题，就是在针对不同基因设计探针时该如何选择荧光基团呢？在选择荧光基团时首先要考虑一个问题，您要使用的仪器所配置的荧光通道是怎样的，这里就以Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统和Stilla naica® 6色微滴芯片式数字PCR系统为例来进行说明。▲ 图:多重检测示意图（图源网络，侵删）Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统共有6个荧光通道，最多可同时检测6个基因。为什么能同时检测这么多基因呢，这里就要科普一个小知识了，那就是荧光是怎么产生的。当激发光照射到荧光基团上时，荧光基团就会发出发射光，也就是我们需要的荧光信号，对于不同的荧光基团，其接收的激发光和发射的发射光波长都是不一样的，因此需要根据机器的特性进行选择。对于Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统，只要使用的荧光基团在6个通道的激发和发射波长的范围内，都支持使用。其次，Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统的荧光检测通道的设计之初，就是要覆盖市面上大多数的荧光基团类型，所以基本不需要担心探针适配性问题。▲ 图4:Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统的荧光检测通道naica® 6色微滴芯片式数字PCR系统荧光探针的选择与Azure Cielo™ 6相似，对于naica® 6色微滴芯片式数字PCR系统而言，其同样配置有6个荧光检测通道，6个通道的波长范围也基本覆盖了市面上大部分的荧光基团，无需担心适配性和选择问题。｜欢迎来电垂询｜naica️®六色微滴芯片数字PCR系统开放试用，大家可以拨打电话010-57256059或者官网官微申请，诚挚邀请您到Stilla数字PCR中国技术示范与服务中心参观，期待与您相见。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上实现cfDNA样本的超多重分析：EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit使用TaqMan™ 探针技术用于检测8个点突变，同时使用drop-off方法检测24个19外显子缺失和20外显子插入（图1）。图1. EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit探针设计，包含TaqMan™探针在每个Exon的位置和标记染料应用亮点：☑ EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit单孔实验可靠高灵敏的检测32种的EGFR体细胞突变，包含常见的、稀有的活化突变和耐药突变。☑ EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit可在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上进行超敏且稳定的EGFR突变检测，不同位点的检测限LOD在0.30 - 0.46 cp/µL之间。☑ 使用Crystal Miner软件和定制EGFR 6色数据分析模板可快速、直接分析NSCLC患者cfDNA样本。单孔检测NSCLC样本中>90%的EGFR突变：液体活检是对非固体生物样本的取样和分析，最常见的是血液。液体活检是一种微创和直接的采样方法，可以克服肿瘤的异质性，使用循环肿瘤DNA（ctDNA），用于肿瘤生物标志物分析。ctDNA检测需要一种高灵敏度和高可靠性的检测技术，以精准定量在高背景野生型基因中较低水平的突变基因。数字PCR已成为下一代液体活检分析的强大技术。法国Stilla Technologies的naica®6色微滴芯片数字PCR系统是一种超灵敏的数字PCR技术，能够同时准确地定量单个样本中的大量生物标志物，简化检测过程，最大限度地减少检测差异，并显著缩短实际操作时间。非小细胞肺癌（NSCLC）是全球癌症高死亡率的主要原因。表皮生长因子受体（EGFR）突变是NSCLC中众所周知的致病变异。超多重EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit 可以使用循环游离DNA（cfDNA）检测NSCLC中90%以上的EGFR突变，包括外显子18、19、20和21中32个常见的、稀有的活化位点和耐药位点（表1）。表1EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit检测EGFR突变EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上实现超灵敏检测EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit适用于高灵敏naica®6色微滴芯片数字PCR系统。为确定各EGFR靶点的检测灵敏度，空白限LOB和检测限LOD的测定参照美国临床实验室标准协会(CLSI) EP17-A2标准(Protocols For Determination Of Limits Of Detection And Limits Of Quantitation; Approved Guideline)。EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit检测EGFR突变的空白限LOB范围0.06 - 0.17 copies /µL之间，检测限LOD范围0.30 - 0.46 cp/µL（表2）。表2. 根据CLSI EP17-A2标准测定EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ kit的LOB和LOD（Sapphire芯片，反应体系中的拷贝数cp/ul）为了评估EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit的灵敏度，在120 cp/µL野生型EGFR DNA 的背景下，采用线性梯度检测方法检测EGFR Exon19号外显子缺失、Exon20号外显子插入、L858R、G719A、L861Q、T790M、C797S（GC）和C797S（TA）突变，浓度从64 cp/µL稀释到到0.25 cp/µL(图3)。EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit可超敏且稳定的检测出所有突变。图3.在野生型EGFR 120 cp/µl(3000copies每25µl)的背景下，测定EGFR Exon19号外显子缺失、Exon20号外显子插入、L858R、G719A、L861Q、T790M、C797S (GC)和C797S (TA)突变（理论浓度64cp/µl、32 cp/µl、16 cp/µl、8 cp/µl、4cp/µl、2 cp/µl、1 cp/µl、0.5 cp/µl和0.25 cp/µl）。使用合成的Ultramer™突变DNA模板(大小从97到124个核苷酸)和野生型人类基因组DNA。图中显示的是每个突变的≥三次重复的平均值和标准误差。EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上具有超高重复性EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit批间检测高度重复，不同目标基因定量检测的RSDs(相对标准偏差)范围为4.5 ~ 8.6% (N = 12)（图4）。图4.  EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ kit的批间重复性。通过用EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit比较12个不同批次(N = 12)中1个阳性对照样品获得的结果测定批间重复性EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上具有超高特异性EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit具有高特异性，无假阳性出现（表3）。表3  使用EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR平台进行特异性检测。使用合成的Ultramer™突变DNA和野生型人类基因组DNA作为模板进行重复反应EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit与Crystal Miner软件结合提供的数据分析模板直接生成2D图(图5)，并快速获得高度一致的结果。图5. 使用Crystal Miner软件和个性化的EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit分析模板分析L858R和T790M阳性的NSCLC cfDNA样本的示例。cfDNA样本在预期结果和测量结果之间显示出完美的一致性。x轴和y轴对应相应通道的荧光强度｜欢迎试用｜naica️®六色微滴芯片数字PCR系统开放试用，大家可以拨打电话010-57256059或者官网官微申请，诚挚邀请您到Stilla数字PCR中国技术示范与服务中心参观，期待与您相见。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

法国巴斯德研究所发表高分文章（NATURE IMMUNOLOGY，IF:25.6），使用法国Stilla Technologies公司naica®微滴芯片数字PCR系统和艾普拜生物Apexbio新冠病毒数字PCR检测试剂盒量化血浆中新冠病毒载量。南非于11月24日发现的新冠新变种Omicron（奥密克戎）再次引起了人们对新冠病毒的关注，奥密克戎最特殊的地方在于其在RBD(受体结合域)有15个突变位点之多，而Delta只有2个，以免疫逃逸能力著称的Beta也不过3个，这是对现有治疗方案和疫苗方案的严峻挑战，之前广受关注的再生元中和抗体组合疗法已经宣布对Omicron无效，这些事实表明我们需要对新冠病毒所产生的病理和免疫反应有更加深入的了解，以帮助我们战胜疫情。近日，法国巴斯德研究所的科学家运用naica®微滴芯片数字PCR系统、细胞因子检测等技术，在NATURE IMMUNOLOGY（IF：25.6）上发表了一篇系统性分析新冠病毒进入人体后免疫反应的文章，并对微生物群落与新冠病毒之间的潜在关系进行了探索，进一步解开人体对新冠病毒的免疫特性。应用亮点1.naica®微滴芯片式数字PCR系统检测血浆中新冠病毒载量，并确认与病程相关2. 不同组织中的新冠病毒载量与症状程度并不完全一致3.鼻微生物组影响COVID-19患者的局部黏膜和全身免疫反应SARS-CoV-2感染后不同人之间的临床表现差异极大，从无症状或轻微症状到可发展为急性呼吸窘迫综合征的严重肺炎都有出现，这种疾病进展相关的病理生理学调控机制的差异与病毒感染本身、宿主免疫反应、宿主共病或这些不同因素的组合的关系仍然未知。为了了解这一过程，本文对急性感染的不同临床表型的COVID-19患者进行检测，包括鼻咽拭子和血浆样本中的SARS-CoV-2刺突特异性抗体、细胞因子、病毒载量和细菌群落进行了综合分析。对血浆及鼻咽部进行抗体检测的结果表明感染后人体会对SARS-CoV-2刺突蛋白产生很强的局部和全身体液反应。对COVID-19患者的46种不同细胞因子反应进行了分析的结果表明，细胞因子的反应是分区的。抗体与细胞因子这种明显的差异是否是由于病毒载量的差异直接导致的？对血浆样本中的病毒载量检测使用naica®微滴芯片数字PCR方法，Apexbio新冠病毒数字PCR检测试剂盒，鼻咽部病毒载量使用qPCR方法进行检测。患者局部粘膜（鼻咽部）和全身（血浆）的病毒载量均有所增加(图1a)，但相关性不强(图1b)。血浆病毒载量随着疾病严重程度的增加而增加，但鼻咽病毒载量在很大程度上与临床表现无关(图1a)，对病毒载量、细胞因子和抗体反应特征进行了多维标度(MDS)和相关矩阵（图1c，图2a）分析，发现病毒载量与系统性炎症反应(IL-6、TNF和CCL19)和监管细胞因子(IL-10和IL-1RA)呈正相关，但与抗病毒干扰素(IFN-α2)无关，这与此前报道的SARS-CoV-2诱导过度炎症以及干扰素反应可在初始感染中发挥控制作用相一致。血浆病毒载量与伪中和活性的定位不同(与血浆的刺突特异性IgG和IgA形成一个簇;图1 c)。病毒载量与病毒特异性抗体反应呈弱正相关（图2a），表明系统病毒载量在驱动刺突特异性体液免疫中发挥作用。而鼻咽部的MDS投影却明显不同。病毒载量与刺突特异性IgG和IgA反应密切相关。但病毒载量与任何炎症或调节细胞因子均不相关，却与IL-33、CSF3和IFN-γ呈强负相关(图1e，图2)。这些细胞因子在患者中减少，这可能与SARS-CoV-2感染有关。图1：SARS-CoV-2抗病毒免疫反应在局部和系统上存在差异。a，通过数字PCR评估血浆病毒载量，通过RT-PCR评估鼻咽拭子中病毒载量，以相对拷贝数(cp) / ml表示;N = 61(左)和N = 42(右)。b，血浆中的病毒载量与鼻咽部的相关图。c,e, MDS预测血浆(细胞因子，抗体和血浆病毒载量;C)和鼻咽部(细胞因子、抗体和鼻腔病毒载量;e).虚线代表最相关的分析物。图2：SARS-CoV-2抗病毒免疫反应具有局部和系统特异性。不同组织的免疫相关矩阵(a)全身系统(血浆细胞因子，血浆抗体，血清病毒中和，血液病毒载量)，(b)鼻咽部（鼻腔细胞因子，鼻腔抗体，鼻腔病毒中和，鼻腔病毒载量)通过对鼻咽部共生菌群的分析发现，SARS-CoV-2感染与鼻咽细菌群落的干扰以及伴随的COVID-19危重型患者的生物失调相关。本文研究结果揭示了鼻咽免疫和全身免疫之间的不同反应，且重症COVID-19对鼻咽细胞因子和微生物组有强烈影响。这些结果为SARS-CoV-2感染患者的管理提供了新的策略。期刊名： NATURE IMMUNOLOGY影响因子：25.6法国巴斯德研究所是世界上最著名的研究所之一，成立130余年来一直走在世界科技前沿，是微生物学、免疫学、传染病学等学科的起源地，曾开发出狂犬病疫苗、天花疫苗、流感疫苗、黄热病疫苗等多个造福人类的疫苗产品，并培养了10名诺贝尔奖生理学或医学奖获得者，实现研究、教育、健康、创新“四位一体”的研究机构。法国巴斯德所（巴黎总部）｜欢迎试用｜naica️®六色微滴芯片数字PCR系统开放试用，大家可以拨打电话010-57256059或者官网官微申请，诚挚邀请您到Stilla数字PCR中国技术示范与服务中心参观，期待与您相见。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。