qPCR体系优化和常见问题分析

qPCR实验的工作流程首先需要确定研究的目的，根据实验设计规划好实验分组、重复次数等细节。接下来分为样本准备和引物探针验证两个重要的步骤。样本准备主要是核酸提取逆转录等步骤，引物探针需要去测试特异性和效率。接下来需要使用qPCR仪来对样品中的目的核酸进行扩增qPCR结束后根据实验目的对目的核酸进行相对或者绝对定量。

如何处理实时荧光定量PCR数据

Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统融合了高品质Peltier温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏的可靠结果。Azure Cielo 3/6检测通道，可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3触控系统，主机本身可独立运行、连接、远程交互，让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。

PCR原理、PCR扩增影响因素及预防解决方案

通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程，结合相应软件可以对结果进行分析，通过标准曲线对未知模板进行定量分析，计算待测样本的初始模板浓度。

核酸降解知多少

在实验过程中，最心累的莫过于好不容易提取的核酸却降解了。那么核酸为什么会发生降解呢，我们又该如何预防呢？关于核酸降解，你了解多少呢？让我们一起对核酸降解一探究竟吧。

一文揽尽：荧光定量PCR扩增曲线哪个阶段最重要

扩增的荧光信号高于背景荧光信号，扩增曲线起峰，开始进入指数期。在指数期内，每个循环积聚的产物准确加倍（假定100%反应效率）。该阶段的PCR反应具有高度特异性和精确度。因为所有试剂均充足，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍，所以产物出现指数级扩增。只有在这个阶段，Cq值与初始模板量的对数之间存在线性关系，所以在此阶段进行定量分析最合适。

荧光定量PCR之RNA提取及质量评估

常见的RNA提取方法有异硫氰酸胍-苯酚法（Trizol法）、离心柱法和磁珠法。Trizol法是动物组织及动物细胞总RNA提取最常用的方法。Trizol法裂解能力较强，尤其适合小样本及特别难提取的组织，如皮肤，动物结缔组织等总RNA的提取；另外Trizol作为一种通用型的裂解试剂，还可以用于植物组织、细菌、真菌等组织的提取。离心柱法是一种十分稳定的RNA提取方法，电泳条带较为均一，但分子量较小的RNA会被过滤掉。磁珠法是使RNA与纳米磁珠结合，在磁场作用下，磁珠-核酸复合物与液体分离，再把核酸从磁珠上洗脱下来。对于含多糖多酚的植物组织如油茶、茶叶、油菜等还可以使用CTAB法进行总RNA的提取。那么在RNA提取过程中如何防止RNA降解，保证RNA质量？

qPCR性能分析--四大要素

MIQE指南中明确提出，进行qPCR实验时必须测定以下检测性能特点：PCR的效率、线性动态范围、LOD和精密度。

OMG！扩增子大小对qPCR产量影响辣么大～

实时荧光定量PCR引物设计原则中会提到扩增子大小对实时荧光定量PCR的扩增效率有一定作用。所以通常建议使用相对较短的扩增子长度，范围为50到150个碱基对（bp）。由于小片段不太容易在传统PCR中所用的琼脂糖凝胶上显现，因此这种小片段扩增在传统PCR中检测更为困难。qPCR的出现使得扩增小于100bp的基因片段成为可能。本文将为大家介绍扩增子大小对qPCR产量的影响，表明使用小片段检测的优势所在。

Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统轻松实现6重RT-qPCR的准确检测

多重实时荧光定量PCR为研究多个靶点提供了许多优势。首先，一次PCR检测多个基因省时省力，可以更快地获得结果，同时最大限度地减少使用耗材，如PCR管或板。此外，每个样本可以获得更多的信息，这在样本量有限的情况下尤其重要。最后，由于RNA水平或基因拷贝数在同一反应中直接比较，因此不需要参比染料来校正孔或板之间的移液差异。

如何确认RNA的质量

实时荧光定量PCR技术是通过测定RNA的转录水平来评估基因的活力。RNA样本提取的质量直接影响基因表达分析。影响RNA品质的因素有以下三种：RNA浓度、RNA纯度和RNA完整性。

Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统检测单拷贝DNA灵敏度更高

Azure Cielo™ 3和Cielo™ 6 实时荧光定量PCR系统具有卓越的灵敏度。该系统配置新型的高性能光学系统，采用16组光纤单孔扫描设计，一根光纤用于高能LED激发，另一根用于光信号检测，可16孔同时采集(图1)。特殊的激发/发射方式保证单孔扫描时仅激发一个孔，光纤传导也有效消除光散射，完全避免孔外区域的激发，减少背景噪声的来源，以便更灵敏的检测。

PCR扩增效率的评估

做过PCR的小伙伴都知道，PCR前期的验证引物探针性能和确定最适反应条件是确保正式实验顺利进行的前提。PCR实验中有个相当重要的工作——即是PCR扩增效率的评估。扩增效率是PCR检测性能最重要的指标之一，也是定量分析计算结果时所需要的参数。接下来，让小编给大家细细说来吧。

qPCR实验的重要影响因素--抑制剂

Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。

您的qPCR内参选对了吗

实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。由于其精准度好、灵敏度高，在分子生物学研究和医学研究等方面得到了广泛的应用，尤其是在基因表达差异分析方面。基因表达差异分析一般是比较不同时空样本或不同处理样本（药物处理，物理处理和化学处理等）之间特定基因的表达差异。

如何做好近红外Western Blot实验，需要关注这5点

化学发光Western Blot的流程大家再熟悉不过，近红外荧光Western与化学发光步骤基本相似，但是有些小伙伴做不好荧光Western，小编给大家总结了做荧光Western的几点注意事项,赶紧下载下来看看吧！

6通道的Azure Cielo Real Time荧光定量PCR系统现货供应

美国Azure Cielo 实时荧光定量PCR系统配备高精准的帕尔贴温度模块，卓越的CMOS+16组光纤荧光检测系统和智能化的三位一体操作软件。6色荧光通道适用于多种新冠病毒检测试剂盒，获得CE、TÜV认证。现货供应，欢迎咨询。

PCR实验分区知多少

常规需要设置3个独立的分区：试剂耗材储存与准备区、样品处理和样品制备区，扩增检测区，各区域空间完全独立；实验室实施空气流向控制，扩增前和扩增后区域应具有独立的通风系统，扩增后区域保持负压状态，其他区域保持常压，防止扩增产物进入扩增前的区域。