Western Blot结果出乎意料，有可能是转印海绵垫惹的祸

您上一次何时更换的转印海绵垫？答案可能是“从不”。因为如果转印有效，为什么要更换？只有当海绵变成灰色和块状时，才会想起来更换。 但是具有多年Western Blot经验的Azure技术专家对定期更换转印海绵垫给出了必要性的解释，我们来具体看一看： ★ 为什么更换海绵垫很重要？★ 转印问题的常见根源是三明治结构的松紧度。三明治结构一定要紧！请定期更换转印海绵垫，以确保实验结果的准确性。使用额外的滤纸来填补海绵的磨损，可能会导致传输不一致。 我们都会定期更换海绵垫，因为它们会吸收污染物，随着时间的推移，转印海绵垫也会被污染。使用干净的海绵垫对荧光应用尤为关键，因为这些污染物会产生自发荧光，从而导致高背景。

Western blot除了化学发光检测，还有更优秀的近红外荧光检测方法

在介绍近红外荧光凝胶成像凝胶成像检测方法之前，我们来回顾下化学发光的历史：WB是目前蛋白检测的主要方法之一，1981年由尼尔·伯奈特（Neal Burnette）所著的《分析生物化学》中首次被提出，一直延续至今，仍有很多忠实的粉丝。

万水千山总是情，全新Azure总蛋白定量肯定行

目前，多个主流期刊和免疫印迹专家提出了看家基因已经不适合作为内参使用了。因为大多数看家基因都是高丰度蛋白，其产生的信号大多都会接近线性动态范围的上限，当我们在检测低丰度蛋白的时候，往往蛋白的上样量会很大，易造成信号过饱和，这时候常见的内参产生的信号已经不能正确反应上样量的差异了。并且研究发现一些看家基因的表达并不是恒定的，它会随着发育阶段的不同等因素产生变化，所以使用看家基因的定量并不可靠。

让蛋白质磷酸化清晰可见

WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时候，会特别沮丧。Azure君在此给大家列出几点小建议，希望能帮助您改善一下实验结果。 1、样本是否表达： 查阅资料或通过预实验确定。 2、对照设置： 阳性和阴性对照。 总蛋白抗体对照，对于特定时间的特定样品，磷酸化和非磷酸化蛋白质的总和代表该特定蛋白质的总量。在相同的 WB 检测中， 磷酸化蛋白质的量增加通常伴随着非磷酸化蛋白质的降低。 3、内参设置： 根据实验选择合适的内参，如Actin、GAPDH 等

蛋白Marker不准，裁膜不易，多重荧光检测来帮您

Marker就像仪表盘一样，是个小细节，然而如果仪表盘不准，显示速度并非真实速度，你还敢开吗？同样的蛋白Marker对实验结果同样起着不可忽视的作用，Marker的主要作用就是用来指示蛋白条带对应的分子量大小，只有精确无误，实验才有说服力，可见细节对实验结果有着不可忽视的作用。

成像光学元件小科普!

当我们听到诸如光学系统，光电倍增管，二极管的时候，是不是觉得这些词汇太过专业了，虽然物理课学过，但印象总是很朦胧。今天小编就带大家来了解一下这些词汇都是啥（当然物理专业大佬除外哈~~~）

WB实验总做不好，那么如何进行WB实验质控呢？

做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安，出来结果时的彷徨无措，为什么条带没有出啦，为什么背景这么高，为什么受伤的总是我，看着旁边小伙伴漂亮的结果图，心生羡慕嫉妒，那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。

上样质控和抗体验证用于Westernblot定量

今天的帖子的灵感来自于我和同事在教他们SDS-PAGE和western blot的实验交谈中。 他们对于qRT-PCR（R）和流式细胞术（R）精通，特别关心如何以及为什么使用某些上样质控，还有其它的技术被使用验证，蛋白质表达和抗体特异性的变化。

湿转和干转，哪种方法更适合您的蛋白实验？

对于一个完美的westernblot实验，蛋白在聚丙烯凝胶中根据天然分子量进行分离，蛋白被很好的从凝胶上转移到固相支持物上，然后通过特异性的抗体进行免疫检测。 对于转印来说，使用湿转的方法是比较好的，因为凝胶和膜都能够完全浸没在转印buffer中，在半干转的条件下，转印是在两个电极板之间发生，这种类型的转印装置可能影响蛋白的转印效率和膜上的截留能力。对于优化蛋白的转印条件，每个系统的优缺点都应该考虑进去。