2022/02/23 09:15
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方案摘要:
产品配置单:
上海仪电分析-LC220液相色谱仪(LC)
型号: LC220
产地: 上海
品牌: 仪电分析
¥5万 - 10万
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方案详情:
【仪电分析】预混合饲料中维生素B12的测定
高效液相色谱法
维生素B12不仅参与牲畜、禽类、鱼类体内碳基团的代谢,而且参与牲畜、禽类、鱼类核酸和蛋白质的合成,促进了细胞的发育和成熟,使牲畜、禽类、鱼类增重加快。当维生素B12 缺乏时,糖在牲畜、禽类、鱼类组织中的利用过程发生障碍,牲畜、禽类、鱼类表现为食欲减退,生长慢或失重,严重消瘦,异食癖和极度贫血死亡。所以维生素B12 添加剂作为牲畜、禽类、鱼类饲料中必不可少的成分,在饲料产业中有着广泛的应用。
本实验参考GB/T 17819-2017 《添加剂预混合饲料中维生素B12的测定 高效液相色谱法》,本方法适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中维生素B12的测定。
一、方法原理
维生素预混料用流动相提取,试液注入高效液相色谱柱,用紫外检测器在361nm处测定,外标法计算维生素B12的含量。
二、主要仪器及试剂
a. 高效液相色谱仪:L220,带紫外检测器;
b. 超声波水浴;
c. 自动进样器;
d. 电子天平;
e. 针式过滤器;
f. 乙腈:色谱纯;
g. 甲醇:色谱纯。
三、实验方法
3.1 色谱参考条件
色谱柱:Welch C18,200 mm×4.6 mm×5μm;
进样量:10 μL;
流动相:水+乙腈
时间梯度0-10 min 5%乙腈,10-25 min 5%→35%乙腈,25-30 min 35%乙腈,30-35 min 5%乙腈;
流速:1.0 mL/min;
柱温:30 ℃;
波长:361 nm;
3.2 维生素B12 标准工作液配置
将0.1 g维生素B12 标准物溶于100 mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解定容,使该标准储备液的浓度为100 μg/mL。置4 ℃冰箱保存,可保存期3个月。
分别配置浓度为5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL的工作液,待上机。
3.3 试样溶液的制备
称取维生素混合饲料0.10 g,精确至0.0001 g,置于100 mL棕色容量瓶中,加入100 mL水,在超声波提取器中超声提取15 min,取适量溶液离心后取上清液,过滤,滤液过0.45 μm(或0.20 μm)滤膜,待上机。
测定:取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间按定性,峰面积外标法定量。
四、实验结果
4.1 标准工作曲线的绘制
维生素B12工作曲线见图1:
图1 维生素B12工作曲线
4.2 标准工作液色谱图
标准工作液色谱图见图2
图2 标准工作液色谱图
4.3 预混料实际样品色谱图
实际样品色谱图见图3:
图3 实际样品色谱图
4.4 计算
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