【仪电分析】预混合饲料中泛酸的测定-高效液相色谱法

【仪电分析】预混合饲料中泛酸的测定-高效液相色谱法

泛酸又叫维生素B5，是一种水溶性维生素，在饲料工业用作维生素添加剂，提高动物对病原体的抵抗力。还能调节蛋白质、碳水化合物及脂肪的代谢，保持皮肤和黏膜，改善毛发（或羽色）色泽以及预防疾病的发生，特别是对家禽家畜及鱼科类动物生长发育、脂肪的合成和分解，对泛酸的需求是必不可少的。

本方法适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中泛酸的测定。参考标准GB/T 18397-2014《预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》。

一、方法原理

维生素预混料用流动相提取，试液注入高效液相色谱柱，用紫外检测器在200nm处测定，外标法计算泛酸的含量。

二、主要仪器及试剂

a. 高效液相色谱仪：L220，带紫外检测器；

b.    超声波水浴；

c. 自动进样器；

d. 离心机（3000 r/min）；

e. 电子天平；

f. 样品筛。

三、实验方法

3.1 色谱参考条件

色谱柱：C18，4.6 mm×250 mm×5μm；

进样量：10 μL；

流动相流速：1.0 mL/min；

柱温：室温；

波长：200 nm；

3.2 流动相配制

将50 mL的乙腈加入到950 mL 0.05%磷酸溶液中混匀。

3.3 泛酸标准工作液配制

将20 mg泛酸钙（泛酸=0.920×泛酸钙）标准物溶于50 mL棕色容量瓶中，用流动相定容，使该标准储备液中泛酸的浓度为368 μg/mL。置4 ℃冰箱保存，可保存期3个月。

分别准确吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL、20 mL于50 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，得到浓度为3.68 μg/mL、7.36 μg/mL、14.72 μg/mL、36.8 μg/mL、73.6μg/mL、147.2 μg/mL的标准泛酸工作液。

3.4 试样溶液的制备

称取维生素混合饲料0.10 g，精确至0.0001 g，置于50 mL棕色容量瓶中，加入20 mL流动相，在超声波提取器中超声提取15 min（中间旋摇一次以防样品附着瓶底），取适量溶液离心后取上清液，过滤，滤液过0.45 μm（或0.20 μm）滤膜，再用流动相稀释5倍，待上机。

测定：取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间按定性，外标峰面积法定量。

四、实验结果

4.1 泛酸工作曲线

泛酸工作曲线见图1：

图1 泛酸工作曲线

4.2 标样色谱图

浓度为73.6 μg/mL的泛酸标准工作液色谱图见图2：

图2 泛酸标准工作液谱图

4.3 预混料实际样品色谱图

样品色谱图见图3：

 图3 样品色谱图

4.4 数据计算

平均峰面积：S=（S1+S2+S3）÷3=（757783.688+774184.813+773599.375）÷3=768522.625

样品溶液中含泛酸浓度：y=0.00017X-1.7579=128.89 μg/mL

0.1 g样品中含泛酸的质量：m=y×5×20=12.889 mg

该饲料中泛酸含量：w=128.89 g/kg