【仪电分析】咸鸭蛋黄中苏丹红的检测-高效液相色谱法

【仪电分析】咸鸭蛋黄中苏丹红的检测-高效液相色谱法

端午将至，粽子、咸鸭蛋正热销，大家购买时要当心苏丹红染色的有毒“红心”咸鸭蛋。 “红心”鸭蛋因营养价值高大受欢迎，一些不法商贩就动了歪脑筋，通过给饲料里添加工业染料苏丹红四号，得到鲜红的“红心”咸鸭蛋，极大地危害了消费者的健康。

近年来欧盟和我国都严禁使用苏丹红作为食品添加剂，参考国家标准GB/T 19681-2005《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》，我们采用反相高效液相色谱仪对苏丹红I号、II号和IV号进行了测定。

一、方法原理    

样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。

二、主要仪器和试剂

a. 高效液相色谱仪： LC220，配备紫外检测器；

b. 万分之一天平；

c. 超声波清洗机；

d. 旋转蒸发仪；

e. 离心机；

f. 苏丹红检测专用固相萃取柱；

g. 苏丹红标准储备液：准确称取适量苏丹红标准物质，用乙腈配制成10 µg/mL的标准贮备液待用；

h. 乙腈：色谱纯。

i. 正己烷：色谱纯。

三、实验方法

3.1 色谱参考条件

色谱柱：C18，4.6 mm(i.d)×250mm，5μm；

梯度程序：

流动相A: 乙腈       流动相B: 0.2%磷酸水溶液

流速：1 mL/min；

柱温：40℃；

波长：518 nm；

进样体积：20 μL。

3.2 样品制备

3.2.1 样品提取

准确称取咸鸭蛋黄1.0g于三角瓶中，加入10mL正己烷，涡旋1min后振荡5min，超声5min，4000r/min离心5min，收集上清液。下层残留物用10mL正己烷按上述步骤重复提取一次，合并两次上清液，用旋转蒸发仪浓缩至近干，再加入5 mL正己烷混匀，待用。

3.2.2 SPE柱净化：

a. 活化：苏丹红检测柱使用前用10 mL正己烷活化；

b. 上样和洗脱：苏丹红检测柱上加入待净化液，弃去流出液；依次加入5 mL正己烷、5 mL 1%乙酸乙酯正己烷淋洗，弃去淋洗液；再加入10 mL 30%乙酸乙酯-正己烷溶液，收集洗脱液。（整个上样洗脱过程均保持流速1 mL/min)；

c. 洗脱液在40 ℃下减压蒸馏近干，加1mL 40%甲基叔丁基醚甲醇溶液定容，过0.45μm 滤膜后供HPLC分析。

四、实验结果

4.1 混合标准样品色谱图

浓度为2.5 μg/mL 的混合标准样品色谱图如图1所示：

 图1 混合样品色谱图

4.2 标准工作曲线

苏丹红I号工作曲线如图2所示，苏丹红II号工作曲线如图3所示，苏丹红IV号工作曲线如图4所示：

图2 苏丹红I号工作曲线

图3 苏丹红II号工作曲线

图4 苏丹红IV号工作曲线

4.3 小结

实验中前处理步骤选用专用的苏丹红萃取小柱，去油效果佳，能有效去除油酯等干扰，有较高的回收率和稳定性；采用二元高压梯度，三种苏丹红组分有很好的分离效果和重复性。此方法也适用于其他食品基质中苏丹红的检测。