【仪电分析】花椒中麻味物质的测定-高效液相色谱法

【仪电分析】花椒中麻味物质的测定-高效液相色谱法

花椒既是一种常用的食品调味料，被誉为“八大调味品”之一，又是一味传统中药，具有抑菌、麻醉和兴奋等作用。花椒和泥在古时用于涂抹在墙壁上，取温暖、芳香、多子之义，所以名为“椒房”，主指古代皇后所居住的宫殿。花椒中的不饱和脂肪酸酰胺是重要的活性成分，也是呈麻味的主要成分。

一、方法原理

通过高效液相色谱测试已知麻度花椒的峰面积，利用单点法测试供试品的峰面积后计算出供试品麻度（杂峰较少所以有一定的可行性）。

二、主要仪器及试剂

a.高效液相色谱仪：LC220；

b. C18反向柱；

c. 水浴锅；

d. 超声波清洗仪；

e. 甲醇。

三、实验方法

3.1 参考色谱条件

流动相：水—甲醇；

进样量：20 μL；

流速：0.8 mL/min；

检测波长：254 nm。

梯度洗脱条件：

3.2 样品测试

3.2.1与已知浓度样品做对照（方法一）

准确吸取0.5 mL成品花椒油，置于具塞三角瓶中，用分析纯甲醇稀释到150 mL，于40 ℃—50 ℃水浴中，期间每10—15 min摇晃几次使甲醇充分浸提出待测成分，持续1 h，然后拿出静止2—3 h待溶液清澈即可或用离心机离心5 min加快分层去除乳化，处理结束用针头过滤器过滤待测。

已知其中样品1麻度，测得样品1峰面积及样品2峰面积可得样品2麻度，如下式所示：

式中：m—麻度，S—峰面积。

3.2.2 与花椒做对照（方法二）

a. 对照品配制

花椒麻味物质对照品贮备液（100 μg/mL的甲醇溶液）：准确称取100 mg花椒麻味物质对照品，在容量瓶中用甲醇定容至1000mL。-10 ℃以下，可保存2年。

花椒麻味物质对照品使用液：分别吸取花椒麻味物质对照品贮备液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL，用甲醇溶解并定容至 10 mL，配制成分别相当于10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL浓度的花椒麻味物质对照品使用溶液。

b. 供试品制备

准确称取样品0.5 g—1 g（精确到0.01 g），置于具塞三角瓶中，用150 mL 的分析纯甲醇于40 ℃—50 ℃水浴中振荡浸提30 min后，再将其转移到分液漏斗中，振摇2 min，静置分层后，收集甲醇萃取液。甲醇不溶部分再用少量甲醇萃取2次—3次，合并甲醇萃取液，定容至500 mL，并用0.45 μm孔径滤膜过滤，滤液待测。

四、实验结果

4.1 对照品谱图

已知麻度的对照品谱图如图1所示：

 图1 已知麻度的对照品谱图

4.2 结果计算

样品中花椒麻味物质的含量（x）以毫克每克（mg/g）表示，按下式计算：

式中：

x—待测液中花椒麻味物质的含量（mg/g）；

c—在工作曲线上查出或回归方程求出的花椒麻味物质的含量（μg/mL）；

m—样品的质量（g）；

V—待测液的定容体积（mL）；

1号样品峰面积为904万，2号样品峰面积538万，3号样品峰面积510万。

2号样品按麻度3度计，

3号样品麻度为：510/538×3=2.84

1号麻度为：904/538×3=5.04

2.84X+5.04(1-X)=3，X=92.7%，即92.7%体积的样品1加7.3%体积的样品3可制得样品2的麻度。