【仪电分析】雨生红球藻粉中虾青素的测定-液相色谱法

【仪电分析】雨生红球藻粉中虾青素的测定-液相色谱法

虾青素是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一，具有许多重要的生物学功能，可作为维生素A原，抗氧化性强于β -胡萝卜素和维生素E，虾青素能清除体内由紫外线照射产生的自由基、抑制多不饱和脂肪酸的氧化、调节免疫功能改善视力、加速色素形成以及抗肿瘤等。

一、方法原理

用甲醇-二氯甲烷（体积比3:1）的混合溶剂，在恒温水浴振荡器中振荡后低温下离心，重复2-3次，收集上清液，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

二、主要仪器及试剂

a. 高效液相色谱仪：LC220；

b. 针式过滤器；

c. 电子天平；

d. 高速冷冻离心机；

e. 水浴恒温振荡器；

f. 虾青素标准品；

g. 甲醇：色谱纯；

h. 二氯甲烷：分析纯。

三、实验方法

3.1 参考色谱条件

3.2 标准溶液配制

a. 准确称取10.0 mg虾青素标准品，用甲醇-二氯甲烷（体积比为3:1）溶剂定容于100 mL的棕色容量瓶中，制得100mg/mL虾青素储备液，密封冷藏备用。

b. 取6个洁净的1ml容量瓶，预先加入适量的甲醇-二氯甲烷（体积比为3:1）溶剂，然后分别加入10μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL的虾青素标准储备液，配制成虾青素浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL的标准系列，按参考的色谱条件进样，以虾青素的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制线性回归方程，由色谱工作站处理数据得到的回归方程。

3.3 样品预处理

用二次蒸馏水将雨生红球藻粉样品水洗3次后冷冻干燥，称取5 g已除去水分的藻粉于具塞三角瓶中，加入甲醇-二氯甲院（体积比为3:1）的混合溶剂50 mL，同时加10颗玻璃珠，最后将三角瓶外罩褐色塑料薄膜，放入40℃的水浴恒温振荡器中振荡30min，提取液在低温下离心20 min，将上清液转移至另一三角瓶中。重复以上的提取步骤2~3次，直至藻粉中的色素基本提取完全，藻粉沉淀呈土灰色。收集所有的上清液，混合，低温冷藏待测。

四、实验结果

4.1 标准工作曲线

虾青素的标准工作曲线如图1所示：

 图1 虾青素标准工作曲线

4.2 标准样品色谱图

浓度为10mg/L的虾青素标准溶液的色谱图如图2所示：

 图2 浓度为10mg/L的虾青素标准溶液色谱图

4.3 实际样品测试

取某样品经前处理，测试结果未检出。