【仪电分析】化妆品中6-甲基香豆素的测定-气相色谱法

【仪电分析】化妆品中6-甲基香豆素的测定-气相色谱法

香豆素是一种可以在很多植物中发现的化合物，此外还可以人工合成这种物质。由于具有特殊的气味，很多人喜欢用它作为食品添加剂和香水成分使用。香豆素被视为对肝脏和肾脏存在潜在毒性，有毒理实验发现，香豆素是大鼠的可疑致肿瘤物，此外，对人体肝脏有损伤。因此，香料的安全性将直接影响化妆品的安全性。

本方法参考《化妆品安全技术规范》（2015版）中第二法：气相色谱法，该方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、粉类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。

一、方法原理

样品处理后，经气相色谱仪分离，氢火焰离子化检测器（FID）检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。

二、主要仪器及试剂

a. 气相色谱仪：GC128，配备FID检测器；

b. 毛细管色谱柱：HP-5MS，30m×0.32mm×25μm；

c. 分析天平；

d. 超声波清洗机；

e. 甲醇：色谱纯；

f. 无水硫酸钠：分析纯；

g. 6-甲基香豆素：纯度≥99.0%；

三、实验方法

3.1 气相色谱参考条件

柱箱温度：90℃保持1min，以10℃/min的速率升温至210℃，保持5min；

进样口温度：200℃；

检测器温度：200℃；

柱流量：1.0 mL/min；

进样量：1.0 μL；

进样方式：分流进样；

分流比：5：1。

3.2标准曲线的绘制

3.2.1 6-甲基香豆素标准储备液：准确称取标准品6-甲基香豆素0.100g于100mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。即得浓度为1000μg/ mL的 6-甲基香豆素的标准储备溶液。

3.2.2 标准工作液：准确移取1 mL标准储备液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，充分摇匀，即得100μg/ mL的标准工作溶液。分别取0.25 mL、 0.5 mL 、1 .5 mL、 2.5 mL、 4 mL标准工作液于5 mL容量瓶中甲醇定容，即得到浓度为5μg/ mL、10μg/ mL、30μg/ mL、50μg/ mL、80μg/ mL的标准工作溶液，在4℃冰箱中，可使用1周。

按上述参考色谱条件，浓度由低到高分别进样1μL，以溶液的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，作标准曲线得线性回归方程。

3.3 样品预处理

称取化妆品1.0g(精确至0.01g)样品于50mL锥形瓶中，加6mL甲醇。超声振荡20min,溶液转入10mL容量瓶中，用少量甲醇清洗锥形瓶，洗液移入10mL容量瓶，用甲醇定容后加入3g无水硫酸钠脱水，经0.45μm滤膜过滤，滤液作为待测样液。

四、实验结果

4.1 标准工作曲线

6-甲基香豆素的标准工作曲线如图1所示：

图1 6-甲基香豆素标准工作曲线

4.2 标准溶液色谱图

浓度为100μg/ mL的6-甲基香豆素标准溶液的色谱图如图2所示：

图2 浓度为100μg/ mL的6-甲基香豆素标准溶液色谱图

4.3 样品色谱图

样品经前处理，按照仪器参考条件分析测定，得到的色谱图如图3所示：

图3 样品色谱图

4.4 结果计算

 6-甲基香豆素含量按下式计算：

X=

式中：

X—试样中6-甲基香豆素的质量百分比含量%

C—从标准曲线中得出的6-甲基香豆素浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）

V—试样溶液的体积，单位为毫升（mL）

m—试样的质量，单位为克（g）

计算结果保留两位有效数字

4.5 实际样品测试

对市面上某化妆品进行分析测定，测试结果未检出。

4.6 定性、定量重复性测试

以某一浓度溶液连续进样7次，计算相对标准偏差，结果如图4所示。由结果可以看出，定性测试的相对标准偏差为0.14%，定量测试的相对标准偏差为2.71%。

图4 重复性测试结果