【仪电分析】化妆品中6-甲基香豆素的测定-液相色谱法

【仪电分析】化妆品中6-甲基香豆素的测定-液相色谱法

香豆素是一种可以在很多植物中发现的化合物，此外还可以人工合成这种物质。由于具有特殊的气味，很多人喜欢用它作为食品添加剂和香水成分使用。香豆素被视为对肝脏和肾脏存在潜在毒性，有毒理实验发现，香豆素是大鼠的可疑致肿瘤物，此外，对人体肝脏有损伤。因此，香料的安全性将直接影响化妆品的安全性。

本方法参考《化妆品安全技术规范》（2015版）中第一法：高效液相色谱法，该方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、粉类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。

一、方法原理

样品处理后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。

二、主要仪器及试剂

a.高效液相色谱仪：LC220，配备紫外检测器；

b.自动进样器：AS2000；

c.色谱柱：C18，4.6mm×250mm，粒径为5µm；

d.分析天平；

e.离心机；

f.超声波清洗机；

g.涡旋振荡器；

h.甲醇：色谱纯；

i.磷酸二氢钠：分析纯；

j.6-甲基香豆素：纯度≥99.0%；

k.磷酸：分析纯。

三、实验方法

3.1 参考色谱条件

流动相A：甲醇。

流动相B：磷酸二氢钠缓冲溶液[c(NaH₂PO₄)=0.02mol/L，pH =3.5]：称取3.12g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000mL，磷酸调pH值至3.5。

3.2 标准曲线的绘制 

3.2.1 标准储备溶液Ⅰ：称取6-甲基香豆素0.1g（精确到0.0001g）于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/mL的6-甲基香豆素标准储备溶液。

3.2.2 标准储备溶液Ⅱ：精密量取标准储备溶液Ⅰ 5mL于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得浓度为100µg/ mL的6-甲基香豆素标准储备溶液。

3.3.3 标准系列溶液：取6个洁净的10ml容量瓶，预先加入适量的甲醇，然后分别量取10μL、50μL、100μL、300μL、500μL、1000μL的标准储备溶液Ⅱ，配制成含6-甲基香豆素的质量浓度分别为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、3.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL的标准系列溶液。按照仪器参考条件，由低浓度到高浓度依次进样分析，以浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。

3.3 样品预处理

称取样品1g（精确到0.001g）于10mL容量瓶中，加入5mL甲醇，涡旋振荡使样品与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇稀释至刻度，混匀后转移至10mL刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液备用。

四、实验结果

4.1 标准工作曲线

6-甲基香豆素的标准工作曲线如图1所示：

图1 6-甲基香豆素标准工作曲线

4.2 标准溶液色谱图

浓度为10.0μg/mL的6-甲基香豆素标准溶液的色谱图如图2所示：

图2 浓度为10.0μg/mL的6-甲基香豆素标准溶液色谱图

4.3 样品色谱图

样品经前处理，按照仪器参考条件分析测定，得到的色谱图如图3所示：

图3 样品色谱图

4.4 结果计算

式中：

ω——化妆品中6-甲基香豆素的质量分数，%；

m——样品取样量，g；

ρ——从标准曲线得到待测组分的质量浓度，μg/L；

V——样品定容体积，mL。

4.5 实际样品测试

对市面上某化妆品进行分析测定，测试结果未检出。