反转录酶M-MLV

M1701 反转录酶M-MLV 反转录酶M-MLV 进口/国产 10000u 支

M-MLV 逆转录酶是从Moloney Murine Leukemia Virus分离出来的，是一种依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶，可以以RNA或DNA为模板在引物存在的情况下完成互补DNA链的合成；同时具Ribonuclease H (RNase H)酶活性，可以选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，但不剪切单链RNA或双链RNA。

反转录酶M-MLV应用领域：RT-PCR 和cDNA合成；引物延伸。

逆转录酶（M-MLV）一个活性单位定义为在37℃，10min条件下，使1nmol的脱氧核糖核酸掺入酸性沉淀物质所需的酶量。

二、试剂盒组份

组份 Cat：BM371(4000 u) Cat：BM372 (1000 u) Cat：BM373 (20000 u)

逆转录酶（M-MLV） 20μL 50μL 100μL

10× M-MLV Reaction Buffer 60μL 150μL 300μL

DTT 30μL 80μL 150μL

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

无RNase酶的1.5m L离心管，可调移液器，PCR仪，无RNase的无菌水，dNTPs (10mM)，引物（Oligo dT（18）或随机引物或特异性引物），RNA模板，RNase抑制剂

四、反转录酶M-MLV保存条件：

-20℃保存，一年有效。

五、注意事项：

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

六、操作规程

A、cDNA第一条链的合成(First-strand cDNA Synthesis)：

1、使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s。

2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml PCR管，参考如下表格设置反转录反应（20μL反应体系）：

模板（后面3种任选一种） Total RNA 0.01～5μg（n μL）

或Poly(A) RNA/mRNA 1～500ng（n μL）

或Specific RNA 0.01pg ～500ng（n μL）

引物（后面3种任选一种） Oligo(dT)18 1μL

随机引物 1μL

特异性引物 1μL

d NTPs 1μL

无RNase的无菌水 To 15.5μL

65℃孵育5分钟，随后立即放置到冰浴冷却5min，4℃微离心，随后加入下述试剂

RNase抑制剂(40u/μL) 0.5μL

10× M-MLV Reaction Buffer 2 μL

DTT 1 μL

逆转录酶(M-MLV） 1 μL

总体积 20 μL

3、反转录酶M-MLV轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀)，随后2000rpm离心20s沉淀液体。

4、如果使用Oligo(dT)18作为引物或使用基因特异性引物，在37℃孵育60分钟。如果使用随机引物作为引物，先在25℃孵育10分钟，随后在37℃孵育60分钟。注意：对于GC含量比较高的RNA模板的反转录反应，可以设置为42℃孵育60min。

5、70℃孵育10min以失活逆转录酶并终止反转录反应。

6、反转录产物可以直接用于下一步的PCR反应，也可以-20℃冻存以备以后使用。