DNA病毒基因组提取试剂盒

D2400-50 DNA病毒基因组提取试剂盒 DNA病毒基因组提取试剂盒 国产 50T 盒

DNA病毒基因组提取试剂盒

规格：50T/ 100T

保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长

试剂盒内容： D2400-50T D2400-100T

蛋白酶K 1ml 1ml×2

结合液 25ml 50ml

DNA病毒基因组提取试剂盒漂洗液 15ml 15ml×2

洗脱液 10ml 20ml

吸附柱 50个 100个

收集管 50个 100个

说明书 1份 1份

产品简介:

本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组，不适合于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取病毒上清液0.5ml，12000rpm离心5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀。

2、向病毒上清中加入20ul的蛋白酶K（10mg/ml），充分混匀，65℃消化10-20min，期间可颠倒离心管混匀数次。

3、向管中加入500ul结合液，充分混匀。再向管中加入400ul无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min。（吸附柱的最大容积为750ul，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。）

4、DNA病毒基因组提取试剂盒12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

5、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7、12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，     否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

8、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。

9、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min，即可得到高质量的病毒基因组DNA。

注意事项:

1、蛋白酶K需放置-20℃保存。

2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA段较小且提取量也下降。

3、若结合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解再使用，不影响效果。

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率。洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

5、DNA病毒基因组提取试剂盒DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。D260值为1.0相当于大约50 ug/ml双链DNA、40 ug/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

6、如果病毒含量过低，最后提取的基因组DNA电泳可能无法检测到，但PCR等其他实验还会有结果。