大鼠单核细胞趋化蛋白3,MCP-3/CCL7 ELISA

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ELISA试剂盒的清洗操作注意事项

 (1)试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

(2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

(3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

(4)使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

(5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

(6)洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

(7)底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

(8)加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

(9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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试剂盒操作中出现的问题：现象、可能原因和解决办法：

1、 不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同，务必按照所用试剂盒严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性.

2、 若不同批号试剂的不同组分（A液或酶工作液），或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。

3、 加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响极大，建议校对加样器。

4、 反应时间的误差，做大量标本时，第一孔和最后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。

5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加样器，不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀，是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。

6、 阈值附近实际上是个灰区（gray scale）,不能截然分为阴性、阳性，国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检，以次数多者为准，如一次阳两次阴最后判为阴，但实际上是否为阴不好说，只有判为可疑，临床上可以让患者过一段时间后再测。

7、 肉眼观察稍显色，酶标仪打印为阴性的标本在实际工作中是难以避免的，肉眼目测结果不可靠，应以酶标仪判读为准。

8、 由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。

9、 临界值附近标本波动为正常现象，任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。

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