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测试剂盒检测原理
ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
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ELISA实验操作注意事项:
大部分实验室在使用酶标仪之前是通过目测判断结果,操作过程随意性较大,在使用酶标仪后操作必须规范:
A. 使用移液器加液,移液枪头不能混用。
B. 洗板要干净,避免交叉污染。
C. 严格按照试剂盒的说明书操作,反应时间准确。
D. 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部,操作完成注意做好清洁工作。
E. 不要在测量过程中关闭电源。
F. 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实际情况及时修改参数,以达到最佳效果。
G. 使用后盖好防尘罩。
H. 出现技术故障时应及时与厂家联系,切勿擅自拆卸酶标仪。
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