1. 在切片加上一抗后，第二抗体标记多聚螯合物酶（HRP）的复合物与一抗结合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信号有显著的放大，其敏感性较SABC、SP法高。 2. 由于多聚物在体内不存在，又不使用生物素，从而避免了由于生物素引起的非特异性背景染色，背景比SABC、SP法清晰。 3. 辣根过氧化物酶与二抗结合在多聚物上，替代传统方法的 二抗、三抗，减少了实验步骤，且试剂孵育时间短，只需15分钟，使得免疫组化方法更简单，实验时间比SABC、SP法大为缩短。

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

一、包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 μg /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱。 二、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。 三、每凹孔加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃作用1～2小时。 四、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。

micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir在miRNA功能实验中具有非常重要的作用，分别通过模拟miRNA的作用和竞争性抑制/特异性降解内源miRNA的作用而进行功能获得性（gain-of-function）和或功能缺失性（loss-of-function）研究。micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir具有更高的稳定性，在复杂的环境中能保持更长时间的活性，同时具有更高的细胞透过率，在没有转染试剂的情况下，也可以克服细胞膜等障碍而进入靶细胞中发挥作用。micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir可以通过局部注射或尾静脉注射等多种方式给药，可作用于局部的组织如大脑、肌肉、皮肤、眼睛、鼻腔、耳蜗、肿瘤块等，或者体内血管丰富的器官组织，可维持长达数周的效果。

注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值 大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10

利用ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血液（指血，静脉血），尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等，这些样本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。 (一) 临床样本的收集 A、血液样本 有些生理因素，如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化，有些甚至还有昼夜变化。因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰，以条件一致为宜，如无法避免，应在标本上注明该因素。 1．外周血 一般选取左手无名指内侧采血，该部位应无冻疮，炎症，水肿，破损。如该部位不符合要求，以其他手指部位代替。对烧伤病人，可选择皮肤完整处采血。由于部分血液常规检测（如白细胞计数、分类等）受生理因素影响波动过大，比较时宜使条件尽量一致。涉及到体内出、凝血功能的检测项目（如血小板计数，出血时间或凝血时间等）的检测，一定要注意了解患者是否用过抗凝、促凝药物，以便在减少或避免干扰因素的影响。 2．静脉血 除涉及各种止血和血栓检测等项目需采用抗凝静脉血血浆外，目前绝大多数检测项目的分析检测可直接采用静脉血的血清。在血清检测项目中，有些（如血糖，血脂等）受饮食及昼夜因素影响较大，一般以清晨空腹血标本为宜；有些在血中衰变较快（血清酶活性测定如ACP活性等），0~4℃贮存活性减弱也不一，这些项目的检测必须及时而快速；有些（如肌酸激酶等）受运动等因素影响较大。抽血时避免溶血的发生也十分重要，尤其涉及血钾，LDH等的测定。 B、尿液样本 同血标本一样，尿液标本受饮食、运动、药物量等因素的影响也较大，特别是饮食的影响，故一般来说晨尿优于随机尿。晨尿是指清晨起床后的第一次尿标本，较浓缩和酸化，有形成分（如血细胞，上皮细胞，管形）相对集中便于观察。随机尿即随意一次尿，留取方便，但受饮食、运动、药物影响较甚，易于出现假阳性和假阴性结果，如饮食性蛋白尿，饮食性糖尿，维生素C干扰潜血结果等。餐后尿（午餐后2小时收集的患者尿液）适用于尿糖，尿蛋白和尿胆原的检查，此时的尿标本可增加试验敏感性，检出较轻微的病变。12小时尿细胞计数即Addis计数（前晚8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液），因时间较长，细菌易繁殖，须加入防腐剂甲醛。24小时尿（第一天晨8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液）中化学物质的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羟类固醇，儿茶酚胺，Ca2+等，检测不同的物质，选择不同的防腐剂防腐。清洁中段尿多用于尿细菌培养，要求无菌，冲洗外阴后留取标本。所有尿标本的收集都应足量，最少12 ml，最好50 ml，定时尿须全部收集，对女性患者应避免阴道分泌物、经血污染尿标本。 C、粪便样本 粪便标本的检测对判断消化系统疾病有重要参考价值。采集时要求用干净的竹签选取含有粘液、脓血等异常病变成分的粪便，对外观无异常的粪便须从表面、深处及粪端多处取材。找寄生虫虫体及作虫卵计数应收集24小时粪便。查痢疾阿米巴滋养体应于排便后立即检查，从有脓血和稀软处取材，保温送检。查日本血吸虫虫卵时应取粘液、脓血部分，孵化毛蚴时至少留取30g粪便，且需尽快处理。检查蛲虫卵须用透明薄膜拭子于晚12时或清晨排便前自肛门周围皱襞处拭取并立即镜检。隐血试验（化学法），试验前3日禁食肉类及含动物血食物并禁服铁剂，维生素C等。所有粪便标本采集后1小时内应检查完毕，以防止有形成分受消化酶及pH的破坏,来不及检测的，应及时用PBS进行缓冲处理，离心去上清保存。 D、脑脊液样本 脑脊液标本采集后立即送检，放置过久将影响检验结果：如细胞变性，破坏，导致计数和分类不准；有些化学物质如葡萄糖等将分解含量减少；细菌发生自溶影响细菌的检出率。脑脊液抽取后一般分装三个无菌管，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查，三管的顺序不宜颠倒。因标本采集较难，全部送检和检测过程应注意安全。 E、胸腹水样本 与脑脊液标本一样，采集后的标本注意安全，及时送检。一般也分装三管，一管作常规细胞学检查，一管生化检查，一管细菌培养，顺序以与脑脊液相同为宜。 F、前列腺液样本 前列腺液标本由前列腺按摩后采集，液量少时直接滴在载玻片上及时送检，须注意防止标本蒸干，量多时收集在洁净干燥的试管中。若按摩不出前列腺液，可检查按摩后的尿液沉渣。

注意以下事项： 1， 用蒸馏水或者去离子水把植物组织冲洗干净，然后用滤纸把周围的水分吸干。 2， 组织重量不能低于50mg 3， 样本的匀浆比例为10%，即1g组织加9ml的匀浆液，匀浆液选取磷酸盐缓冲液（PBS） PH控制在7.2-7.4.

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)水平。用纯化的 人乙酰胆碱受体抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入乙酰胆碱受 体抗体，再与HRP 标记的乙酰胆碱受体抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过 彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化 成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)呈正相关。用酶标仪 在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人乙酰胆碱受体抗体 (AChR-Ab)浓度。