ELISA试剂盒使测定方法达到很高的敏感度

ELISA试剂盒的技术基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，ELISA试剂盒使测定方法达到很高的敏感度又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果。

ELISA试剂盒使测定方法达到很高的敏感度我们采用的酶：辣根过氧化酶（HRP）

1. HRP在蔬菜作物辣根中含量很高。

2. 是一种糖蛋白，含糖量约18％；分子量为44kD。

3. 是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合 而成的一种卟啉蛋白质。

4. 主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有最高吸收峰；辅基是深 棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。

HRP催化下列反应：

DH2+H2O2<==HRP==>D+2H2O

ELISA试剂盒使测定方法达到很高的敏感度上式中DH2为供氢体，H2O2为受氢体。HRP对受氢体的专一 性很高，除H2O2外，仅作用于小分子醇的过氧化物和尿素的过 氧化物。后者为固体，作为试剂较H2O2方便。许多化合物可作 为HRP的供氢体，在ELISA中常用的供氢体底物为邻苯二胺（orthopenylenediamine，OPD）、四甲基联苯胺（3，3'， 5，5'-tetramethylbenzidine，TMB）和ABTS[2，2'-azino- bis(3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6)]。