ELISA试剂盒实验标本的采集的发展

     生物ELISA试剂盒中被充分研究过的一种表观遗传转录调控机制。通常，这种形式的甲基化涉及到多个位点，但是单个CpG位点的甲基化也会影响基因的表达。为了促进单一位点甲基化研究可以选择优化的位点特异性DNA甲基转移酶。

     分裂甲基转移酶，这样它就再也不能很有效地组装，然后你用DNA作为模板，在你想要甲基化的位点上，帮助组装甲基转移酶。因此，你增加了这两半甲基转移酶的局部浓度，可以化解它们没有组装好这一问题。然后，它们可以组装和甲基化那个位点。虽然Ostermeier的方法增加了期望CpG位点的甲基化，但仍然有明显脱离目标的CpG甲基化。因此，在最新的进展中，他和Chaikind转向努力降低非特异性DNA甲基化，同时保持目标位点甲基化。ELISA试剂盒新方法利用一个诱变的质粒文库，这些质粒包含N末端M.SssI片段/ZFD熔合的编码基因和C末端M.SssI片段/ZFD熔合的编码基因。C末端M.SssI片段，在5个选定的残基上携带随机变异推测，这会减少其DNA的亲合力，而不影响催化活性。利用位于甲基化敏感的FspI限制位点（两侧是锌指结合序列）的质粒中的目标CpG位点，研究人员选择来自FspI消化的甲基化依赖保护。

     ELISA试剂盒实验中各类组织匀浆（不易匀浆的组织）的采集、处理和保存；（需要测蛋白浓 度） 采集组织，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，剔除附属的结缔组 织，称取组织块。用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织 的小烧杯放入冰水中）。

    匀浆的方式有多种：   a) 手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。

机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。  c)超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微 米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。 

将制备好的10％匀浆用离心机4℃，3000rpm离心15min，将离心好的匀浆留上清，弃 下面沉淀。 取上清。分装冻存备用，  2-8℃下，可放置保存24-48小时； -20℃下，可放置保存1个月； -70℃下，可放置保存6个月

根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA试剂盒测定。