近平滑念珠菌操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,近平滑念珠菌此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:近平滑念珠菌取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 近平滑念珠菌 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。近平滑念珠菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0304 胃癌细胞,MKN28细胞
XY0305 胃癌细胞,MGC80-3细胞
XY0306 胃癌细胞,MFC细胞
XY0307 宛氏拟青霉
XY0308 脱氮假单胞菌
XY0309 脱氮付球菌
XY0310 团头鲂尾鳍细胞,WCF细胞
XY0311 兔子垂体细胞
XY0312 兔主动脉平滑肌细胞,SMC细胞
XY0313 兔主动脉平滑肌细胞,CCC-SMC-2细胞
XY0314 兔眼Tenon's囊成纤维细胞,RYTF细胞
XY0315 兔肾细胞系 RK-13细胞
XY0316 兔晶体上皮细胞永生系 N/N1003A(RLE)细胞
XY0317 兔角膜前基质层成纤维细胞,RCFBF细胞
XY0318 兔肝癌细胞,VX2细胞,
XY0319 兔成骨C IF细胞
XY0320 土星汉逊酵母
XY0321 土壤伯克氏菌
XY0322 土曲霉
XY0323 头孢霉
XY0324 铜绿假单胞菌
XY0325 停乳链球菌
XY0326 天蓝色链霉菌
XY0327 藤黄微球菌/腾黄八叠球菌
XY0328 藤黄八叠球菌
XY0329 桃色欧文氏菌
XY0330 糖化酵母
XY0331 胎盘绒毛癌细胞,JAR细胞
XY0332 胎儿骨髓间充质细胞,FBM细胞
XY0333 塔宾曲霉
XY0334 宋氏志贺氏菌
XY0335 斯氏油脂酵母
XY0336 丝状链霉菌
XY0337 水螺菌
XY0338 水貂肺上皮细胞,MV.1.Lu细胞
XY0339 树状微杆菌
XY0340 鼠杂交骨髓瘤细胞,K6H6/B5细胞
XY0341 鼠胸腺激酶缺陷细胞株 L-MTK细胞
XY0342 鼠小脑细胞,C8-D1A细胞
XY0343 鼠纤维肉瘤细胞系 WEHI 164细胞
XY0344 鼠细胞系 B82细胞
XY0345 鼠伤寒沙门氏菌
XY0346 鼠乳腺癌细胞系 MA-782细胞
XY0347 鼠肉瘤细胞,S-180-S2D9细胞
XY0348 鼠胚胎成纤维细胞,3T3-Swiss细胞,
XY0349 鼠胚成纤维细胞系 STO细胞
XY0350 鼠胚成骨细胞,3T3-E1细胞