克柔念珠菌

克柔念珠菌操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，克柔念珠菌此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：克柔念珠菌取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. 克柔念珠菌 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。克柔念珠菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。  

XY0237 小鼠腹水瘤细胞,SAC-II B2细胞

XY0238 小鼠腹水瘤细胞,S-180细胞,

XY0239 小鼠肺腺癌细胞系 LA795细胞

XY0240 小鼠肺成纤维细胞,L929细胞

XY0241 小鼠肺癌细胞,LLC细胞

XY0242 小鼠肺癌细胞,LLC1[LL/2]细胞

XY0243 小鼠肺癌细胞,Lewis细胞,

XY0244 小鼠肥大细胞瘤细胞,P815细胞

XY0245 小鼠肥大细胞,P815细胞,

XY0246 小鼠单核细胞白血病细胞,Raw-Blue细胞

XY0247 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,RAW264.7细胞

XY0248 小鼠单核巨噬细胞,J774A.1细胞

XY0249 小鼠大肠癌细胞,CT-26.WT细胞

XY0250 小鼠垂体细胞,MPC细胞

XY0251 小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素) AtT-20细胞

XY0252 小鼠垂体瘤细胞,GT1-1细胞

XY0253 小鼠垂体瘤细胞,AtT-20细胞

XY0254 小鼠垂体瘤 ATT-20细胞,

XY0255 小鼠成纤维细胞系 McCoy细胞

XY0256 小鼠成纤维细胞,NIH-3T3细胞

XY0257 小鼠成纤维细胞,NCTC clone 929细胞

XY0258 小鼠成纤维细胞,L929细胞

XY0259 小鼠成纤维细胞,L929-EGFP-puro细胞

XY0260 小鼠成纤维细胞,C3H 10T1/2 2A6细胞

XY0261 小鼠成纤维细胞,3T3细胞

XY0262 小鼠成纤维细胞,3T3NIH细胞

XY0263 小鼠成肌细胞,C2C12细胞,

XY0264 小鼠成骨细胞系 MC3T3-E1细胞

XY0265 小鼠成骨细胞,2T3细胞,

XY0266 小鼠表皮细胞,JB6 Cl 30-7b细胞

XY0267 小鼠白血病细胞G-CSF依赖性 NFS-60细胞

XY0268 小鼠白血病细胞,P388细胞

XY0269 小鼠白血病细胞,M1细胞