枯草芽孢杆菌黑色变种操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,枯草芽孢杆菌黑色变种此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:枯草芽孢杆菌黑色变种取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 枯草芽孢杆菌黑色变种 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。枯草芽孢杆菌黑色变种传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY1435 光滑念珠菌
XY1436 光孢短柄帚霉
XY1437 骨髓瘤细胞株 U266细胞,
XY1438 骨髓瘤细胞,SP2/0细胞
XY1439 骨髓瘤细胞,P3X63Ag8细胞
XY1440 骨髓瘤细胞,P3X63Ag8.653细胞
XY1441 骨髓瘤细胞,P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]细胞
XY1442 骨髓瘤细胞,FO细胞
XY1443 骨肉瘤细胞,U-2 OS细胞
XY1444 骨肉瘤细胞,SW1353细胞
XY1445 骨肉瘤细胞,MG-63细胞
XY1446 谷氨酸棒杆菌
XY1447 构巢曲霉
XY1448 狗肾细胞隆突型 MDCK superdome细胞
XY1449 狗肾细胞,Super Tube细胞
XY1450 狗肾细胞,MDCK细胞,
XY1451 狗肾细胞,MDCK(NBL-2)细胞
XY1452 狗肾细胞,MDCK (NBL-2)细胞
XY1453 狗肾上皮细胞,MDCK-EGFP-puro细胞
XY1454 狗肾恶性组织细胞增生症细胞,DH82细胞,
XY1455 狗垂体细胞
XY1456 宫颈癌细胞,HeLa细胞
XY1457 宫颈癌细胞,HeLa 229)细胞
XY1458 宫颈癌细胞,HCE1细胞
XY1459 根土壤杆菌(发根植物单胞菌)
XY1460 睾丸酮丛毛单胞菌
XY1461 睾丸间质细胞瘤细胞,MLTC-1细胞
XY1462 高转移人肝癌细胞,MHCC97-H细胞,
XY1463 高转移人肝癌细胞,LM3细胞
XY1464 高转移卵巢癌细胞,HO-8910PM细胞
XY1465 高转移肺癌细胞,95-D细胞
XY1466 肝细胞,HL-7702细胞
XY1467 肝卵圆细胞,HOC细胞
XY1468 肝瘤血管内皮细胞,HHVEC 细胞
XY1469 肝癌亚力山大细胞,PLC/PRF/5细胞
XY1470 肝癌细胞,SMMC-7721细胞
XY1471 肝癌细胞,RH-35细胞
XY1472 肝癌细胞,QGY-7703细胞