乙型溶血性链球菌

乙型溶血性链球菌操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，乙型溶血性链球菌此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：乙型溶血性链球菌取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. 乙型溶血性链球菌 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。乙型溶血性链球菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。  

XY0308 脱氮假单胞菌

XY0309 脱氮付球菌

XY0310 团头鲂尾鳍细胞,WCF细胞

XY0311 兔子垂体细胞

XY0312 兔主动脉平滑肌细胞,SMC细胞

XY0313 兔主动脉平滑肌细胞,CCC-SMC-2细胞

XY0314 兔眼Tenon＇s囊成纤维细胞,RYTF细胞

XY0315 兔肾细胞系 RK-13细胞

XY0316 兔晶体上皮细胞永生系 N/N1003A（RLE）细胞

XY0317 兔角膜前基质层成纤维细胞,RCFBF细胞

XY0318 兔肝癌细胞,VX2细胞,

XY0319 兔成骨C IF细胞

XY0320 土星汉逊酵母

XY0321 土壤伯克氏菌

XY0322 土曲霉

XY0323 头孢霉

XY0324 铜绿假单胞菌

XY0325 停乳链球菌

XY0326 天蓝色链霉菌

XY0327 藤黄微球菌/腾黄八叠球菌

XY0328 藤黄八叠球菌

XY0329 桃色欧文氏菌

XY0330 糖化酵母

XY0331 胎盘绒毛癌细胞,JAR细胞

XY0332 胎儿骨髓间充质细胞,FBM细胞

XY0333 塔宾曲霉

XY0334 宋氏志贺氏菌

XY0335 斯氏油脂酵母

XY0336 丝状链霉菌

XY0337 水螺菌

XY0338 水貂肺上皮细胞,MV.1.Lu细胞