近平滑假丝酵母操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,近平滑假丝酵母此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:近平滑假丝酵母取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 近平滑假丝酵母 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。近平滑假丝酵母传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY1190 人膀胱癌细胞,HT-1376细胞
XY1191 人膀胱癌细胞,EJ细胞
XY1192 人膀胱癌细胞,BIU-87细胞
XY1193 人膀胱癌细胞,5637细胞,
XY1194 人膀胱癌细胞,5637(HTB-9)细胞
XY1195 人瘢痕疙瘩成纤维细胞,HKF细胞,
XY1196 人白血病细胞,U937细胞
XY1197 人白血病细胞,SK细胞
XY1198 人白血病细胞,KG-1细胞
XY1199 人白血病细胞,HL-60细胞
XY1200 人白血病细胞,Daudi细胞
XY1201 人白血病阿霉素耐药株 K562/Adr细胞
XY1202 人白血病阿霉素耐药株 HL-60/Ad细胞
XY1203 人XG恶性胶质瘤细胞,SF-295细胞
XY1204 人T细胞淋巴瘤 Hurt-78细胞
XY1205 人T细胞淋巴瘤 Hat-78细胞
XY1206 人T细胞白血病细胞,T-CEM细胞
XY1207 人T细胞白血病细胞,HuT 78细胞
XY1208 人T细胞白血病细胞,A3细胞
XY1209 人T细胞白血病细胞,6T-CEM细胞,
XY1210 人T淋巴细胞系 H9细胞
XY1211 人T淋巴细胞白血病细胞,Jurkat, Clone E6-1细胞
XY1212 人T淋巴细胞白血病细胞,Hut78细胞
XY1213 人T淋巴细胞白血病细胞,A3细胞
XY1214 人T淋巴细胞白血病,CD8+ Molt-4细胞
XY1215 人T淋巴瘤转基因细胞,Jurkat D,E细胞
XY1216 人T淋巴瘤细胞系 Hut-102细胞
XY1217 人T淋巴瘤细胞Jurkat亚系 Jurkat77细胞
XY1218 人SV40转染成骨细胞,hFOB 1.19细胞
XY1219 人SV-40转化肺成纤维细胞, WI-38AV13细胞