表皮葡萄球菌操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,表皮葡萄球菌此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:表皮葡萄球菌取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 表皮葡萄球菌 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。表皮葡萄球菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0983 人骨髓瘤细胞,3T3D细胞
XY0984 人骨髓间充质干细胞,BMSC细胞
XY0985 人骨肉瘤细胞,U-2 OS细胞,
XY0986 人骨肉瘤细胞,U-2 OS-EGFP+puro细胞
XY0987 人骨肉瘤细胞,SW1353细胞
XY0988 人骨肉瘤细胞,SP20细胞
XY0989 人骨肉瘤细胞,MNNG/HOS Cl细胞
XY0990 人骨肉瘤细胞,MG-63细胞
XY0991 人骨肉瘤细胞,Human U2OS细胞
XY0992 人骨肉瘤细胞,HOS细胞
XY0993 人骨肉瘤细胞, U-2 OS细胞
XY0994 人宫颈肠转移癌细胞,CaSki细胞,
XY0995 人宫颈癌细胞(HPV-18 永生化细胞) HeLa229细胞
XY0996 人宫颈癌细胞,SiHa细胞
XY0997 人宫颈癌细胞,HeLa-S3细胞
XY0998 人宫颈癌细胞,Hela-RFP-puro细胞
XY0999 人宫颈癌细胞,Hela-Luc细胞
XY1000 人宫颈癌细胞,Hela P10s-11F细胞
XY1001 人宫颈癌细胞,HeLa 229细胞
XY1002 人宫颈癌细胞,CaSKi细胞
XY1003 人跟骨髓瘤细胞,Hp2/o细胞
XY1004 人高转移卵巢癌细胞,HO-8910PM细胞
XY1005 人高转移肝癌细胞,LM3细胞
XY1006 人高转移肝癌细胞,HCCLM3细胞
XY1007 人高转移肺癌细胞,95-D细胞
XY1008 人高转移肺癌 95-D细胞
XY1009 人高分化结肠腺癌细胞系 THC-8307细胞
XY1010 人感染HCV肝癌细胞,HuH7-HCV细胞
XY1011 人肝转移癌 HCCLMS细胞,
XY1012 人肝永生化细胞,THLE-3细胞
XY1013 人肝星形细胞正常 LX-2细胞
XY1014 人肝星形细胞,LX-2细胞
XY1015 人肝细胞正常 HL-7702细胞
XY1016 人肝细胞,QSG-7701细胞
XY1017 人肝细胞,FL62891细胞
XY1018 人肝内胆管上皮细胞,HIBEpiC细胞
XY1019 人肝母细胞瘤细胞,HuH-6细胞,
XY1020 人肝静脉内皮细胞,ED-25细胞