大肠埃希氏菌

大肠埃希氏菌操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，大肠埃希氏菌此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：大肠埃希氏菌取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. 大肠埃希氏菌 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。大肠埃希氏菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。 

XY0947 人喉表皮样癌细胞,HEp-2细胞

XY0948 人喉表皮样癌细胞,HEp-2细胞

XY0949 人喉癌细胞,TU212细胞

XY0950 人喉癌细胞,TU 686细胞

XY0951 人喉癌细胞,M4e细胞

XY0952 人喉癌细胞,M2e细胞

XY0953 人喉癌上皮细胞,HEP-2细胞

XY0954 人红白细胞白血病细胞ErythroleukemiaHEL细胞

XY0955 人红白细胞白血病细胞,HEL细胞

XY0956 人横纹肌肉瘤细胞,TE671sublineNO.2细胞

XY0957 人横纹肌肉瘤细胞,A-204细胞

XY0958 人横纹癌细胞,A673细胞

XY0959 人黑素瘤细胞,WM-266-4细胞

XY0960 人黑色素瘤细胞株 A375细胞

XY0961 人黑色素瘤细胞,SK37细胞

XY0962 人黑色素瘤细胞,SK23细胞

XY0963 人黑色素瘤细胞,NW38细胞

XY0964 人黑色素瘤细胞,MV3细胞

XY0965 人黑色素瘤细胞,HSC1细胞

XY0966 人黑色素瘤细胞,HS-6细胞

XY0967 人黑色素瘤细胞,HME7细胞

XY0968 人黑色素瘤细胞,HME6细胞

XY0969 人黑色素瘤细胞,HME4细胞

XY0970 人黑色素瘤细胞,HME2细胞

XY0971 人黑色素瘤细胞,HME1细胞

XY0972 人黑色素瘤细胞,B16细胞

XY0973 人黑色素瘤细胞,A875细胞

XY0974 人黑色素瘤细胞,A-375细胞

XY0975 人黑色素瘤细胞,A375.S2细胞

XY0976 人黑色素瘤细胞, M14细胞

XY0977 人冠状动脉内皮细胞,HCAEC细胞

XY0978 人骨头肉瘤细胞,MG-63细胞,

XY0979 人骨髓瘤细胞,U266细胞

XY0980 人骨髓瘤细胞,OPM-2细胞

XY0981 人骨髓瘤细胞,OPM-2-CMV-EGFP细胞

XY0982 人骨髓瘤细胞,NCI-H929-CMV-EGFP细胞