KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株

KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。  

XY0338 水貂肺上皮细胞,MV.1.Lu细胞

XY0339 树状微杆菌

XY0340 鼠杂交骨髓瘤细胞,K6H6/B5细胞

XY0341 鼠胸腺激酶缺陷细胞株 L-MTK细胞

XY0342 鼠小脑细胞,C8-D1A细胞

XY0343 鼠纤维肉瘤细胞系 WEHI 164细胞

XY0344 鼠细胞系 B82细胞

XY0345 鼠伤寒沙门氏菌

XY0346 鼠乳腺癌细胞系 MA-782细胞

XY0347 鼠肉瘤细胞,S-180-S2D9细胞

XY0348 鼠胚胎成纤维细胞,3T3-Swiss细胞,

XY0349 鼠胚成纤维细胞系 STO细胞

XY0350 鼠胚成骨细胞,3T3-E1细胞

XY0351 鼠逆转录酶病毒包装细胞,PT67细胞

XY0352 鼠李糖乳杆菌

XY0353 鼠肌原细胞,C2C12细胞

XY0354 鼠黑色素瘤细胞系 B16-Fo细胞

XY0355 鼠骨髓瘤细胞,SP2/0-Ag14细胞

XY0356 鼠骨髓瘤 J558L细胞,

XY0357 鼠肝星形细胞,HSC-T6细胞

XY0358 鼠肝癌细胞系 MM45T.Li细胞

XY0359 鼠肝癌细胞,H22-H8D8细胞

XY0360 鼠腹水瘤 EAC-E2G8细胞

XY0361 鼠腹水单核细胞瘤 J774A.1细胞

XY0362 鼠成纤维细胞系 GR细胞

XY0363 噬糖盐红菌

XY0364 嗜盐细菌属

XY0365 嗜酸乳杆菌

XY0366 嗜热脂肪芽孢杆菌

XY0367 嗜热脂肪地芽孢杆菌

XY0368 嗜热乳酸链球菌

XY0369 嗜热链球菌

XY0370 屎肠球菌

XY0371 屎肠球菌

XY0372 食油假单胞菌