615小鼠T细胞性白血病瘤株操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,615小鼠T细胞性白血病瘤株此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:615小鼠T细胞性白血病瘤株取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 615小鼠T细胞性白血病瘤株 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。615小鼠T细胞性白血病瘤株传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0133 小鼠肾足细胞,Mouse podocyte细胞
XY0134 小鼠肾小球系膜细胞,SV40 MES13细胞,
XY0135 小鼠肾小球系膜细胞,MES-13细胞
XY0136 小鼠肾腺癌细胞,RAG细胞,
XY0137 小鼠肾系膜细胞,MC53细胞
XY0138 小鼠肾上腺皮质瘤细胞,Y1细胞,
XY0139 小鼠肾集合管细胞(SV40转化) M-1细胞
XY0140 小鼠肾癌细胞株 RuCa细胞
XY0141 小鼠肾癌细胞,Kert-3细胞
XY0142 小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞,NG108-15 [ 108CC15 ]细胞
XY0143 小鼠神经母细胞瘤细胞与大鼠胶质瘤细胞之融合细胞,NG108-15细胞
XY0144 小鼠神经胶质瘤细胞,G422细胞
XY0145 小鼠软骨细胞,ATDC-5-EGFP细胞
XY0146 小鼠乳腺肿瘤细胞,C127细胞,
XY0147 小鼠乳腺癌细胞株 EMT-6细胞
XY0148 小鼠乳腺癌细胞,MA891细胞
XY0149 小鼠乳腺癌细胞,CCC-Ca761-03细胞
XY0150 小鼠乳腺癌细胞,4T1细胞
XY0151 小鼠乳腺癌高转移细胞,MA-891细胞
XY0152 小鼠乳腺 EMT6细胞
XY0153 小鼠乳癌細胞 4T1细胞
XY0154 小鼠肉瘤 S37细胞
XY0155 小鼠前列腺癌细胞,RM-1细胞,
XY0156 小鼠前成骨细胞,MC-3T3细胞
XY0157 小鼠皮下结缔组织细胞,L Wnt-3A细胞,
XY0158 小鼠皮下结缔组织细胞,A9细胞
XY0159 小鼠皮肤细胞,JB6-C41细胞
XY0160 小鼠皮肤细胞,JB6-C30细胞
XY0161 小鼠皮肤黑色素瘤细胞,B16-F10细胞,
XY0162 小鼠胚胎纤维细胞,STO细胞
XY0163 小鼠胚胎细胞,NIH/3T3细胞,
XY0164 小鼠胚胎肝细胞,BNL CL.2细胞,