小鼠肺成纤维细胞

小鼠肺成纤维细胞操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，小鼠肺成纤维细胞此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：小鼠肺成纤维细胞取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. 小鼠肺成纤维细胞 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。小鼠肺成纤维细胞传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。  

XY0001 组织细胞淋巴瘤细胞,U-937细胞

XY0002 总T淋巴细胞,OKT3细胞

XY0003 紫色直丝链霉菌

XY0004 紫红曲霉

XY0005 子宫内膜腺癌细胞,HEC-1-B细胞

XY0006 子宫内膜癌 Ishikawa细胞

XY0007 子宫鳞癌细胞（高分化）HCC 94 [HCC941122]细胞

XY0008 子宫颈癌细胞,SiHa细胞

XY0009 转移胰腺腺癌细胞,AsPC-1细胞

XY0010 转血小板基因仓鼠卵巢细胞,CHO-pt细胞

XY0011 转入Tet-off调控，含EGFP基因的CHO细胞,CHO-AA8细胞

XY0012 转染了tk基因的SW038-C2细胞,SW038-C2-tk细胞

XY0013 转染了microRNA-mock基因的阴性对照细胞,Hela-mock细胞

XY0014 转基因细胞,3T3/Fas/com细胞

XY0015 转基因鼻咽癌细胞系 CNE1-lmp\l细胞

XY0016 转化的豚鼠胎体细胞,104C1细胞

XY0017 转S9基因仓鼠卵巢细胞,ZA6细胞

XY0018 转S9基因仓鼠卵巢细胞,ZA1细胞

XY0019 转PYTL基因小鼠睾丸支持细胞,15P-1细胞

XY0020 转HLA-2基因B细胞,T2细胞

XY0021 砖红链霉菌

XY0022 猪肾细胞系 PK15细胞

XY0023 猪肾细胞系 PK13细胞

XY0024 猪肾细胞系 IBRS-2细胞

XY0025 猪肾细胞,PK-15细胞,

XY0026 猪肾细胞,LLC-PK1细胞

XY0027 猪肾上皮细胞,PK15-EGFP-puro细胞

XY0028 猪肾上皮细胞,PK（15）细胞

XY0029 猪肾近曲小管上皮细胞,LLC-PK1细胞

XY0030 猪髋动脉内皮细胞,PIEC细胞,

XY0031 猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种

XY0032 猪骨髓间质干细胞,Pig MSC细胞