人正常前列腺上皮细胞操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,人正常前列腺上皮细胞此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:人正常前列腺上皮细胞取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 人正常前列腺上皮细胞 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。人正常前列腺上皮细胞传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0921 人胶质母细胞瘤 T98G细胞
XY0922 人胶质瘤细胞,U251细胞
XY0923 人胶质瘤细胞,TJ905细胞
XY0924 人胶质瘤细胞,SKMG4细胞,
XY0925 人胶质瘤细胞,SKMG1细胞
XY0926 人胶质瘤细胞,SHG-44细胞
XY0927 人间皮瘤细胞,NCI-H2452 [H2452]细胞
XY0928 人甲状腺髓样癌细胞,TT细胞
XY0929 人甲状腺鳞癌细胞,SW579细胞,
XY0930 人甲状腺鳞癌细胞,SW579 [SW 579; SW-579]细胞
XY0931 人甲状腺磷癌细胞,SW579细胞
XY0932 人甲状腺导管瘤细胞,TT细胞
XY0933 人甲状腺癌细胞,SW579细胞
XY0934 人急性早幼粒白血病细胞(悬浮)NB4细胞
XY0935 人急性淋巴细胞白血病细胞,CEM/C1细胞,
XY0936 人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞,CCRF-CEM细胞
XY0937 人急性淋巴母细胞白血病细胞,MT-4细胞
XY0938 人急性淋巴母细胞白血病细胞,MOLT-4细胞
XY0939 人急性非B非T淋巴细胞白血病 Reh细胞
XY0940 人急性单核细胞白血病细胞,THP-1细胞
XY0941 人急性成髓细胞白血病 Kasumi-1细胞
XY0942 人急性T细胞白血病 Jurkat细胞,
XY0943 人急性T淋巴细胞白血病细胞,Jurkat细胞
XY0944 人急性T淋巴母细胞白血病细胞,MOLT-4细胞
XY0945 人回盲肠腺癌细胞,HCT-8细胞,
XY0946 人滑膜肉瘤细胞,SW 982细胞,
XY0947 人喉表皮样癌细胞,HEp-2细胞
XY0948 人喉表皮样癌细胞,HEp-2细胞
XY0949 人喉癌细胞,TU212细胞
XY0950 人喉癌细胞,TU 686细胞
XY0951 人喉癌细胞,M4e细胞
XY0952 人喉癌细胞,M2e细胞
XY0953 人喉癌上皮细胞,HEP-2细胞
XY0954 人红白细胞白血病细胞ErythroleukemiaHEL细胞
XY0955 人红白细胞白血病细胞,HEL细胞
XY0956 人横纹肌肉瘤细胞,TE671sublineNO.2细胞