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培养基的实验步骤
标签: 酒精 接种 计数
准备好物品，超净台消毒好。培养基等到位。小鼠颈椎脱臼处死，放入酒精浸泡5min。倒掉酒精，超净台中无菌取小鼠股骨和胫骨，置入成有1640培养基的培养皿 中。注意不要沾到小鼠毛发而污染。骨头上肉不需要剔得太干净，两端骨骺端尽量减掉，方便针头插入。在一只培养 皿中浸泡一遍，转入第二只培养基。除去可能的污染毛发。
在第二只培养基中用1ml针头反复冲洗骨髓腔，直至骨头变白。将获得的骨髓细胞收集于离心管，1000转，5min，离心。弃上清。加入2ml Tris NH4CL裂红，震荡混匀，静置1min。加入15ml 1640终止反应，离心，弃上清。离心时配置培养基：50ml离心管，45ml 1640,5ml 胎牛血清，GM-CSF终浓度10ng/ml， IL-4终浓度1ng/ml。
在弃上清后的离心管中加入25ml配置的培养基，混匀，接种于6孔板，4ml/孔，于37℃，5%CO2培养。3d后可见板底贴壁集落，培养基变黄。更换培养基。
5d后可以用LPS进行刺激，d6测表型。d7测细胞因子。流式细胞仪计数，可培养10e7细胞数。
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