近来,网上关于ELISA试剂盒的讨论帖子很多,今天我也发表一下自己的一些看法,对ELISA的见解有不合错误的地方,希望指正或者直接拍砖。其实许多客户上当上当都和网络有关,要是你不是在baidu或者google上找试剂,而是认真看看帖子,大概会改变你原来的选择。
首先,谈一下市场。首先RnD和Bender等一些着名品牌的ELISA试剂盒照旧很值得信任的,也得到了市场的承认,特别是RnD的试剂盒,我们销量很好,价格也是很公道,当然经费不是很充分的实行室很难消耗的起。
国内的厂家,以前我念书的时间,晶美做的很不错,也受到了客户的好评,后来听说,由于资金链的问题,遣散了,真是可惜。如今我们市场推荐给客户的都是上海吉泰和深圳达科为的试剂盒,质量在灵敏度上和RnD的试剂盒依旧有很大差距,但是有一点是可以肯定的,试剂盒反应的效果是公正客观的。另有一个缺点便是这两个厂家可供选择的盒子种类比较少,主要集中在炎症细胞因子上。
ELISA试剂盒的挑选以及应用
谈一下怎样灵活应用ELISA这个检测方法以及怎样去挑选ELISA试剂盒。ELISA这个方法的原理,大家都很明白,网上的资料很多。可真正用起来的时候,偶然间就会有点犯糊涂,我谈一下自己的理解。
1、有些客户会用OVA(卵清卵白)做一些哮喘,过敏性肠炎的模型,然后会检测粘膜特异性的sIgA以及血清内里IgG,IgE等指标。当客户向我咨询购置这几个指标的试剂盒的时候,我很肯定地说这些指标的检测要你自己特制,不会有商品化的试剂盒出售的。当你baidu或google一下时,页面出来大量的商品化的试剂盒,千篇一律的明书时候,我真的是蒙了,我怀疑自己跟不上时代了。我不去评论这些试剂盒的真假,我仍旧建议做这些检测指标的朋友,选择sigma公司V级别的OVA,然后用这个来造模,自己包板摸条件,用OD值来比较抗体含量的变化。
2、对付一些小分子的检测,例如:前线腺素、糖皮质激素的检测,我的理解是要用竞争法ELISA去检测,也要购买采用这个方法的盒试剂盒。一般细胞因子的检测,都是采用常规的夹心法ELISA检测,由于因子分子量比力大,一般10几个KD左右,很容易找到两个或多个抗原表位。
而小分子很难找到两个不通的表位,也就决定了包被抗体和检测抗体无法同时结合小分子并固相化。解决方案便是酶标板上包被二抗,每个孔加入一定量的酶标的小分子,然后加样品,再加不带标志的检测抗体,显色底物。样品的目标小分子的含量越高,吸光度越低。
3、对付胰岛素的检测,我还是推荐millpore 旗下LInco公司的检测试剂盒,不管是放免还是ELISA,据说专利权在他们手中。 最近看了资料,瑞典Mercodia公司的胰岛素检测试剂盒也是得到市场的承认的。对付ox-ldl的检测,Mercodia公司也是很牛的。
4、NO的检测,一般都是采用经典的Greiss法,如今市场上竟然有NO ELISA试剂盒,真是彻夜未眠也搞不明白。另外还有做氧化应激指标MDA的检测,我还是推荐各位用碧云天或者进口的检测试剂盒,而不是ELISA试剂盒。
5、我主要的客户是医学院校,做实行面向的种属重要是人,大鼠和小鼠,如今市面市情上鸡、牛、马、羊、兔种种指标的盒子都有售,真不知道这些抗体是怎么来的。据我所相识,这些炎症指标依然有很大种属特异性的。
6、ELISA检测方法简单,灵敏度高,我个人认为ELISA最适合检测血清或者培养上清的细胞因子、胰岛素、激素等排泄型的小分子卵白的定量检测;病原体抗原的定性与定量;评估自己制备的血清抗体的效价等。很多客户有个误区,拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测,我还是建议多动脑,该检测活性的检测活性,该做western的做western。
第三 谈一下上海哈灵的ELISA试剂盒,这个公司的产物许多客户也发表了SCI文章,要是我没有记错的话,mouse TGF-beta1 这个试剂盒发表在nature immunology上面,25分多的杂志。这个厂产业的试剂盒,是我公司最主推的盒子,给我的觉得是灵敏度不够高,个位数pg级达不到,血清细胞因子的检出率比力低,在估计范畴内。大概随着国内研究技能的不停改进,我想应该会逐步解决这个问题。
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