TIM-3与CEACAM-1在癌症反应中介导T细胞免疫耐受

首先作者根据之前发现的实验现象："T细胞表面表达CEACAM-3蛋白，这一蛋白可以介导免疫耐受"，利用OT-II小鼠（该小鼠CD4+ T细胞特异性识别OVA蛋白323-339的多肽）以及Ceacam-1（carcinoembryonic antigen cell adhesionmolecule-1）缺失突变OT-II小鼠建立免疫耐受模型。实验结果显示，OVA323-339多肽能够引发野生型OT-II小鼠产生免疫耐受（即CD4+ T细胞增殖受到抑制），然而，Ceacam-1-/- OT-II小鼠则没有出现免疫耐受的现象。之后，作者通过过继移植（adoptive transfer）的方法将CFSE标记的OT-II na?ve CD4+T细胞（这种标记手段可以实现通过流式检测分析细胞增殖情况）分别转移入野生型与Ceacam1-/- 小鼠体内，并辅以OVA323-339多肽的刺激。之后的流式分析显示：导入Ceacam-1-/- 小鼠体内的OT-II na?ve CD4+T细胞其增殖能力明显高于野生型小鼠。出人意料的是，作者发现这部分CD4+T细胞中TIM-3的表达与Ceacam-1的表达具有非常强的相关性。暗示了T细胞表面TIM-3与Ceacam-1存在共表达的特性。

由于TIM-3的配体之前一直不清楚，作者猜想是否TIM-3与Ceacam-1在T细胞表面存在相互作用。作者在HEK293细胞系中过表达hTIM-3与hCeacam-1蛋白，后续的免疫共沉淀实验证明两者存在相互作用，而且TIM-3或Ceacam-3内部若干氨基酸残基的突变会减弱这种相互作用。作者通过结晶学的手段得到了TIM-3与Ceacam-3的共结晶结构，结果显示TIM-3与Ceacam-1在N-端具有非常强的相互作用。至此，生化方式最终证明了两者的关系。

通过代谢标记的方式，作者发现Ceacam-3的存在会增强TIM-3的表达，然而当ceacam-3或TIM-3发生突变后，TIM-3会出现过度的糖基化，并且失去上膜的能力，在细胞内部过度积累。随后，通过比较TIM-3tg，TIM-3tg Ceacam-1-/-小鼠TIM-3在SEB（superantigen staphy2 Tolococcal enterotoxin B，一类可以引起免疫耐受的抗原，作用于OVA类似，但不需要特异性T细胞转基因小鼠）刺激前后的表达水平以及分布情况，发现TIM-3tg小鼠CD4+ T细胞TIM-3在接受刺激后表达量上升，并且上膜效率提高（通过生化与流式分析手段证明），显示出免疫耐受的特性；然而，TIM-3tg Ceacam-1-/-小鼠T细胞TIM-3的表达量与分布则没有如上变化。

在此工作的基础上，作者分析了的TIM-3与 Ceacam-1参与免疫耐受分子机制。作者通过对野生型CD4+T细胞进行Anti-CD3&Anti-CD28的体外刺激，并分别接受N- Ceacam-1的体外刺激与空白处理。结果显示，对照组T细胞出现大量增殖，而N- Ceacam-1刺激后的细胞对Anti-CD3&Anti-CD28的刺激不再敏感。这一结果证明了Ceacam-1负向调控的能力。那么这一作用是否需要TIM-3参与呢？BAT-3是TIM-3下游的一个抑制性分子，它可以与TIM-3进行结合从而抑制TIM-3的活性。作者比较了TIM-3tg（对SEB免疫耐受敏感）以及TIM-3tg Ceacam-1-/-（对免疫耐受不敏感）的小鼠CD4+ T细胞在接受上述刺激之后TIM-3与BAT3的相互作用情况。免疫共沉淀结果显示：在接受刺激之前，两组细胞具有相当的相互结合能力，但在N- Ceacam-1刺激之后，TIM-3tg 小鼠 T细胞中TIM-3与BAT3的相互作用减弱，说明TIM-3得到了活化；而在TIM-3tg Ceacam-1-/-小鼠T细胞中两者的相互作用反而增强了。以上结果说明了Ceacam-1通过TIM-3信号通路影响了T细胞的免疫耐受。

hz0433 人滋养细胞,HTR-8细胞

hz0434 人转移胰腺腺癌细胞,AsPC-细胞

hz0435 人转移胰腺癌细胞,Aspc-1细胞

hz0436 人主动脉血管平滑肌细胞,T/G HA-VSMC细胞

hz0437 人主动脉血管平滑肌细胞,HA-VSMC细胞

hz0438 人直肠腺癌细胞系 HRC-99细胞

hz0439 人支气管上皮细胞,HBE细胞

hz0440 人支气管上皮细胞,BEAS-2B细胞

hz0441 人支气管上皮细胞,16HBE细胞,

hz0442 人正常乳腺细胞,MDA-kb2细胞

hz0443 人正常乳腺上皮细胞,MCF-10A细胞,

hz0444 人正常乳腺上皮细胞,human MCF10A细胞

hz0445 人正常前列腺上皮细胞,RWPE-2细胞

hz0446 人正常前列腺上皮细胞,RWPE-1细胞

hz0447 人正常前列腺基质永生化细胞,WPMY-1细胞

hz0448 人正常皮肤细胞,Hacat细胞,

hz0449 人正常肝细胞,LO2细胞,

hz0450 人正常肝细胞,human QSG-7701细胞

hz0451 人正常肝细胞,human L02细胞

hz0452 人正常肝细胞,HL-7702细胞

hz0453 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞,HBL-100细胞

hz0454 人张氏肝细胞,Chang liver细胞,

hz0455 人原位胰腺腺癌细胞,BxPC-3细胞,

hz0456 人原位胰腺腺癌细胞,BxPc-3-EGFP-puro细胞

hz0457 人原髓细胞白血病细胞,HL-60细胞

hz0458 人原髓细胞白血病细胞,AL7P/HL-60R细胞

hz0459 人原胚肾转化细胞系 293 Ad5+细胞

hz0460 人原巨核细胞型白血病细胞,UT-7细胞

hz0461 人永生化表皮细胞,HaCaT细胞

hz0462 人永生化鼻咽上皮细胞系 NP69细胞,

hz0463 人胰腺腺泡上皮癌 HPAC细胞

hz0464 人胰腺腺癌细胞,Panc 10.05细胞

hz0465 人胰腺细胞,AR42J细胞

hz0466 人胰腺导管腺癌细胞,PL45细胞

hz0467 人胰腺癌细胞系 SW 1990细胞

hz0468 人胰腺癌细胞,SFPAC-1细胞