ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在操作过程中总是会出现或大或小的问题,比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。下面就由我抛砖引玉地来说一下,做的经验总结:
1、有的包被原可能不是小鼠抗红细胞抗体(RBC)ELISA 试剂盒蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被,我把方法扼要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法平均、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保留抗原很重要,我做重组蛋白时,师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。③脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质天然干固在固相表面。
2、应留意以下原理:因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间小鼠抗红细胞抗体(RBC)ELISA 试剂盒的作用,这种物理吸附长短特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。包被液的选择,一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
3、但终极选用什么,要依据试验详细来实践。常用封锁剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲,从而排斥ELISA试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封锁:继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
4、 在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有前提的用洗板机除外),洗的不彻底或串了孔,对如斯敏捷的ELISA系统可是不小的影响。由于聚小鼠抗红细胞抗体(RBC)ELISA 试剂盒苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板:可以说在ELISA操纵中,洗涤是最主要的枢纽技术。
5、加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释,也可用封闭液去稀释。如需加二抗,还要注意二抗的工作浓度,太高浪费,太低则着色浅。
6、显色:显色系统又很多,我们一开始做的时候,要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠。
7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好,小鼠抗红细胞抗体(RBC)ELISA 试剂盒如出现问题也好分析。
大鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ)ELISA试剂盒 Rat major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ ELISA试剂盒
大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒 Rat Bone morphogenetic protein 7,BMP-7 ELISA试剂盒
大鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒 Rat Hyaluronic acid,HA ELISA试剂盒
大鼠胰高血糖素样肽1(Glp-1)ELISA试剂盒 Rat ghcagons-like pepfide 1,GLP-1 ELISA试剂盒
大鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒 Rat Cholecystokinin,CCK ELISA试剂盒
大鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA试剂盒 Rat brain-gut peptides,BGP/Gehrelin ELISA试剂盒
大鼠6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA试剂盒 Rat 6-keto-prostaglandin,6-K-PG ELISA试剂盒
大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒 Rat apoprotein A1,apo-A1 ELISA试剂盒
大鼠载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒 Rat apoprotein B100,apo-B100 ELISA试剂盒
大鼠25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA试剂盒 Rat 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA试剂盒
大鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒 Rat N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA试剂盒
大鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA试剂盒 Rat Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA试剂盒
大鼠维生素C(VC)ELISA试剂盒 Rat Vitamin C,VC ELISA试剂盒
大鼠维生素B6(VB6)ELISA试剂盒 Rat Vitamin B6,VB6 ELISA试剂盒
大鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA试剂盒 Rat Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA试剂盒
大鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒 Rat Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA试剂盒
大鼠可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA试剂盒 Rat soluble P-selectin,sP-selectin ELISA试剂盒
大鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒 Rat Soluble protein-100,S-100 ELISA试剂盒
大鼠S100B蛋白(S-100B)ELISA试剂盒 Rat Soluble protein-100B,S-100B ELISA试剂盒
大鼠白介素1(IL-1)ELISA试剂盒 Rat Interleukin 1,IL-1 ELISA试剂盒
大鼠白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒 Rat Interleukin 1β,IL-1β ELISA试剂盒
大鼠肌红蛋白(MYO/MB)ELISA试剂盒 Rat Myoglobin,MYO/MB ELISA试剂盒
大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA试剂盒 Rat Thromboxane B2,TXB2 ELISA试剂盒
大鼠乙酰胆碱(Ach)ELISA试剂盒 Rat acetylcholine,ACH ELISA试剂盒
大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒 Rat thyrotropin-releasing hormone,TRH ELISA试剂盒
大鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)ELISA试剂盒 Rat Anti-thyroid-globulin antibody,ATGA/TGAB ELISA试剂盒
大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒 Rat corticotropin releasing hormone,CRH ELISA试剂盒
大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒 Rat gonadotropin-releasing hormone,GnRH ELISA试剂盒
大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA试剂盒 Rat Leukotriene B4,LT-B4 ELISA试剂盒
大鼠白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒 Rat leukemia inhibitory factor receptor,LIFR ELISA试剂盒
大鼠表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒 Rat Epidermal growth factor,EGF ELISA试剂盒
大鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒 Rat intestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISA试剂盒
大鼠端粒酶(TE)ELISA试剂盒 Rat telomerase,TE ELISA试剂盒
大鼠基质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA试剂盒 Rat matrix metalloproteinase 5,MMP-5 ELISA试剂盒
大鼠基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒 Rat matrix metalloproteinase 4,MMP-4 ELISA试剂盒
大鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B) ELISA试剂盒 Rat matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA试剂盒
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒 Rat tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1 ELISA试剂盒
大鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)ELISA试剂盒 Rat basic fibroblast growth factor,bFGF ELISA试剂盒
大鼠巨噬细胞炎症蛋白5(MIP-5)ELISA试剂盒 Rat macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISA试剂盒
大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒 Rat Soluble Intercellular Adhesion Molecule 1,sICAM-1 ELISA试剂盒
大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒 Rat soluble Vascuolar cell adhesion molecule 1,sVCAM-1 ELISA试剂盒
大鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒 Rat Immunoglobulin A,IgA ELISA试剂盒
大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒 Rat Immunoglobulin E,IgE ELISA试剂盒
大鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒 Rat Immunoglobulin G,IgG ELISA试剂盒
大鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒 Rat Immunoglobulin M,IgM ELISA试剂盒
大鼠内皮抑素(ES)ELISA试剂盒 Rat Endostatin,ES ELISA试剂盒
大鼠脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒 Rat brain natriuretic peptide,BNP ELISA试剂盒
大鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒 Rat Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA试剂盒
大鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒 Rat Neuron-specific enolase,NSE ELISA试剂盒
大鼠细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA试剂盒 Rat intercellular adhesion molecule 2,ICAM-2 ELISA试剂盒
大鼠细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA试剂盒 Rat intercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA试剂盒
大鼠纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA试剂盒 Rat plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1 ELISA试剂盒
大鼠纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA试剂盒 Rat plasminogen activator inhibitor,PAI ELISA试剂盒
大鼠血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA试剂盒 Rat Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA试剂盒
大鼠血栓调节蛋白(TM)ELISA试剂盒 Rat thrombomodulin,TM ELISA试剂盒
大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒 Rat platelet-derived growth factor,PDGF ELISA试剂盒
大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA试剂盒 Rat oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA试剂盒
大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒 Rat platelet activating factor,PAF ELISA试剂盒
大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒 Rat procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT ELISA试剂盒
大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒 Rat Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISA试剂盒
大鼠C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 Rat C-Reactive Protein,CRP ELISA试剂盒
大鼠组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒 Rat Tissue Polypeptide Antigen,TPA ELISA试剂盒
大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA) ELISA试剂盒 Rat Tissue-type Plasiminogen Actilyse,t-PA ELISA试剂盒
大鼠组织因子(TF)ELISA试剂盒 Rat Tissue factor,TF ELISA试剂盒
大鼠维生素D(VD)ELISA试剂盒 Rat Vitamin D,VD ELISA试剂盒
大鼠维生素K1(VK1)ELISA试剂盒 Rat Vitamin K1,VK1 ELISA试剂盒
大鼠维生素B12(VB12)ELISA试剂盒 Rat Vitamin B12,VB12 ELISA试剂盒
大鼠维生素D3(VD3)ELISA试剂盒 Rat Vitamin D3,VD3 ELISA试剂盒
大鼠维生素D2(VD2)ELISA试剂盒 Rat Vitamin D2,VD2 ELISA试剂盒
大鼠维生素E(VE)ELISA试剂盒 Rat Vitamin E,VE ELISA试剂盒
大鼠维生素A(VA)ELISA试剂盒 Rat Vitamin A,VA ELISA试剂盒
大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA试剂盒 Rat β-Thromboglobulin,β-TG ELISA试剂盒
大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒 Rat Platelet Factor 4,PF-4 ELISA试剂盒
大鼠双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒 Rat Dihydrotestosterone,DHT ELISA试剂盒
大鼠结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒 Rat connective tissue growth factor,CTGF ELISA试剂盒
大鼠抗精子抗体(AsAb)ELISA试剂盒 Rat anti-sperm antibody,AsAb ELISA试剂盒
大鼠甲状旁腺激素(PTH) ELISA试剂盒 Rat Parathyroid hormone,PTH ELISA试剂盒
大鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒 Rat Histamine,HIS ELISA试剂盒
大鼠白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 Rat Interleukin 13,IL-13 ELISA试剂盒
大鼠白介素15(IL-15)ELISA试剂盒 Rat Interleukin 15,IL-15 ELISA试剂盒
大鼠白介素16(IL-16)ELISA试剂盒 Rat Interleukin 16,IL-16 ELISA试剂盒
大鼠白介素17(IL-17)ELISA试剂盒 Rat Interleukin 17,IL-17 ELISA试剂盒
大鼠白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒 Rat soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA试剂盒
大鼠可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒 Rat soluble E-selectin,sE-selectin ELISA试剂盒
大鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒 Rat soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1sRⅡ ELISA试剂盒
大鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒 Rat 17-Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISA试剂盒
大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒 Rat N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA试剂盒
z-E10797人低密度脂蛋白(LDL)ELISA试剂盒Human low density lipoprotein,LDL ELISAkit
hz-E10798人花生四烯酸(AA)ELISA试剂盒Human Arachidonic Acid,AA ELISAkit
hz-E10799人骨涎蛋白(BSP)ELISA试剂盒Human bone sialoprotein,BSP ELISAkit
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hz-E10801人环磷酰胺(CTX)ELISA试剂盒Human Cyclophosphamide,CTX ELISAkit
hz-E10802人1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA试剂盒Human 1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG ELISAkit
hz-E10803人1,5-脱水葡萄糖醇/1,5-脱水山梨(1,5-AG)ELISA试剂盒Human 1,5-anhydroglucitol,1,5-AG ELISAkit
hz-E10804人β羟丁酸(β-OHB)ELISA试剂盒Human Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISAkit
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hz-E10806人N端中段骨钙素(N-MID-OT)ELISA试剂盒Human N-MID Osteocalcin,N-MID-OT ELISAkit
hz-E10807人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)ELISA试剂盒Human low-density lipoprotein-receptor-related protein,LRP-6 ELISAkit
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hz-E10809人低密度脂蛋白受体(LDLR)ELISA试剂盒Human very low density lipoprotein receptor,VLDLR ELISAkit
hz-E10810人高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒Human High density lipoprotein,HDL ELISAkit
hz-E10811人α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)ELISA试剂盒Human α-glutathione S-transferases,α-GST ELISAkit
hz-E10812人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒Human Homocysteic acid,Hcy ELISAkit
hz-E10813人游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒Human free fatty acids,FFA ELISAkit
hz-E10814人骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒Human osteonectin,ON ELISAkit
hz-E10815人叶酸(FA)ELISA试剂盒Human Folic acid,FA ELISAkit
hz-E10816人内毒素(ET)ELISA试剂盒Human endotoxin,ET ELISAkit
hz-E10817人过氧化物酶体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)ELISA试剂盒Human Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISAkit
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