热休克转录因子2(HSF2)单克隆抗体Monoclonal Antibody to Heat Shock Transcription Factor 2 (HSF2)FOR IN VITRO AND RESEARCH USE ONLY, NOT FOR USE IN CLINICAL DIAGNOSTIC PROCEDURES!Organism species    Homo sapiens (Human)    Product No.    hz470Hu22    Clonality    Monoclonal    Host    Mouse    Immunoglobulin Type    IgG    Purification    Affinity Chromatography    Applications    WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA    Concentration    500ug/ml    UOM    200ug    热休克转录因子2(HSF2)单克隆抗体Conjugate    No Conjugate    ANTIBODY SPECIFITYThe antibody is a mouse monoclonal antibody raised against HSF2. It has been selected for its ability to recognize HSF2 in immunohistochemical staining and western blotting.APPLICATIONSWestern blotting: 1:100-400Immunocytochemistry in formalin fixed cells: 1:100-500Immunohistochemistry in formalin fixed frozen section: 1:100-500Immunohistochemistry in paraffin section: 1:50-200Enzyme-linked Immunosorbent Assay: 1:100-200Optimal working dilutions must be determined by end user.热休克转录因子2(HSF2)单克隆抗体CONTENTSForm & Buffer: Supplied as solution form in PBS, pH7.4,containing 0.02% NaN3, 50% glycerol.IHC Images热休克转录因子2(HSF2)单克隆抗体STORAGEStore at 4oC for frequent use. Stored at -20oC to -80oC in a manual defrost freezer for one year without detectable loss of activity. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

骨钙素(OC)单克隆抗体Monoclonal Antibody to Osteocalcin (OC)FOR IN VITRO AND RESEARCH USE ONLY, NOT FOR USE IN CLINICAL DIAGNOSTIC PROCEDURES!Organism species    Homo sapiens (Human)    Product No.    hz471Hu22    Clonality    Monoclonal    Host    Mouse    Immunoglobulin Type    IgG    Purification    Affinity Chromatography    Applications    WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA    Concentration    500ug/ml    UOM    200ug    Conjugate    No Conjugate    骨钙素(OC)单克隆抗体ANTIBODY SPECIFITYThe antibody is a mouse monoclonal antibody raised against OC. It has been selected for its ability to recognize OC in immunohistochemical staining and western blotting.APPLICATIONSWestern blotting: 1:100-400Immunocytochemistry in formalin fixed cells: 1:100-500Immunohistochemistry in formalin fixed frozen section: 1:100-500Immunohistochemistry in paraffin section: 1:50-200Enzyme-linked Immunosorbent Assay: 1:100-200Optimal working dilutions must be determined by end user.骨钙素(OC)单克隆抗体CONTENTSForm & Buffer: Supplied as solution form in PBS, pH7.4,containing 0.02% NaN3, 50% glycerol.IHC ImagesSTORAGEStore at 4oC for frequent use. Stored at -20oC to -80oC in a manual defrost freezer for one year without detectable loss of activity. Avoid repeated freeze-thaw 骨钙素(OC)单克隆抗体cycles.

细胞要分裂 没它可不行！近日，来自美国墨菲特癌症中心的研究人员发现一个叫做TBK1的蛋白在细胞分裂过程中发挥重要作用。相关研究结果发表在国际学术期刊Nature Communication上。 细胞的分裂复制需要经过一个受到严格调控并且高度有序的过程，这一过程也叫细胞周期。在亲代细胞的DNA发生复制之后，复制的DNA和细胞器就会通过有丝分裂过程分配到两个子代细胞中，对细胞周期的合理调控是保证子代细胞遗传得到相同DNA拷贝的必要条件。因此每个细胞周期的开始和完成都需要大量检查以保证DNA的复制和染色体的分离合理发生。这些过程发生任何偏离都可能导致细胞无法获得准确数量的染色体，更有可能加速肿瘤的发生和进展。而癌细胞缺少这些精准的细胞周期调控过程。 有研究发现TBK1能够促进肺癌进展。同时，TBK1也在细胞存活，免疫和肿瘤恶性转化方面发挥重要作用。还有研究证明TBK1能够靶向一些参与有丝分裂的特定蛋白，但是其在有丝分裂中的准确作用还没有得到完全了解。 在这项研究中，研究人员发现TBK1在有丝分裂过程中会受到磷酸基团的修饰，并且TBK1定位于中心体，当TBK1的活性受到干扰，细胞就不能正确地将染色体分配到子代细胞中，而有丝分裂也就无法正常进行。 研究人员报告称TBK1能够直接结合并激活CEP170和NuMA，这两个蛋白都参与有丝分裂过程中的染色体分离过程。当打断TBK1与CEP170或NuMA的相互作用就会导致有丝分裂过程受到损伤，阻止细胞分裂的发生。这项研究首次证明了TBK1能够调节有丝分裂和细胞周期进展。 这些最新发现能够为癌症治疗方法的开发提供新的启示，研究人员表示，靶向癌细胞中的TBK1为癌症治疗开辟了新途径。

磷酯酶Cγ1(PLCγ1)单克隆抗体Monoclonal Antibody to Phospholipase C Gamma 1 (PLCg1)FOR IN VITRO AND RESEARCH USE ONLY, NOT FOR USE IN CLINICAL DIAGNOSTIC PROCEDURES!Organism species    Homo sapiens (Human)    Product No.    hz269Hu22    Clonality    Monoclonal    Host    Mouse    Immunoglobulin Type    IgG    Purification    Affinity Chromatography    Applications    WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA    Concentration    500ug/ml    UOM    200ug    Conjugate    No Conjugate    ANTIBODY SPECIFITYThe antibody is a mouse monoclonal antibody raised against PLCg1. It has been selected for its ability to recognize PLCg1 in immunohistochemical staining and western blotting.APPLICATIONSWestern blotting: 1:100-400Immunocytochemistry in formalin fixed cells: 1:100-500Immunohistochemistry in formalin fixed frozen section: 1:100-500Immunohistochemistry in paraffin section: 1:50-200Enzyme-linked Immunosorbent Assay: 1:100-200Optimal working dilutions must be determined by end user.CONTENTSForm & Buffer: Supplied as solution form in PBS, pH7.4,containing 0.02% NaN3, 50% glycerol.IHC ImagesSTORAGEStore at 4oC for frequent use. Stored at -20oC to -80oC in a manual defrost freezer for one year without detectable loss of activity. Avoid repeated freeze-thaw cycles. 

组织蛋白酶K(CTSK)单克隆抗体Monoclonal Antibody to Cathepsin K (CTSK)FOR IN VITRO AND RESEARCH USE ONLY, NOT FOR USE IN CLINICAL DIAGNOSTIC PROCEDURES!Organism species    Homo sapiens (Human)    Product No.    hz267Hu22    Clonality    Monoclonal    Host    Mouse    Immunoglobulin Type    IgG    Purification    Affinity Chromatography    Applications    WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA    Concentration    500ug/ml    UOM    200ug    Conjugate    No Conjugate    ANTIBODY SPECIFITYThe antibody is a mouse monoclonal antibody raised against CTSK. It has been selected for its ability to recognize CTSK in immunohistochemical staining and western blotting.APPLICATIONSWestern blotting: 1:100-400Immunocytochemistry in formalin fixed cells: 1:100-500Immunohistochemistry in formalin fixed frozen section: 1:100-500Immunohistochemistry in paraffin section: 1:50-200Enzyme-linked Immunosorbent Assay: 1:100-200Optimal working dilutions must be determined by end user.CONTENTSForm & Buffer: Supplied as solution form in PBS, pH7.4,containing 0.02% NaN3, 50% glycerol.IHC ImagesSTORAGEStore at 4oC for frequent use. Stored at -20oC to -80oC in a manual defrost freezer for one year without detectable loss of activity. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

科学家研究核糖体：或揭露38亿年前地球环境北京时间12月11日消息，科学家近日对人类细胞中的分子展开了研究，他们借此追根溯源，成功追踪了生物的演化之路。佐治亚理工学院的专家们发现，地球上的所有生物都是由同一个祖先演变而来的。那已经是38亿年之前的事情了，但地球上首次生命进程留下的“分子指纹”，至今仍留在地球上每一个现存的生物细胞里。佐治亚理工学院的专家们发现，地球上的所有生物都是由同一个祖先演变而来的。那已经是38亿年之前的事情了，但地球上首次生命进程留下的“分子指纹”，至今仍留在地球上每一个现存的生物细胞里这项研究是由NASA赞助的，它不仅能够帮助研究人员了解地球上生命的起源，还将帮助科学家判断生命可能在哪些地外环境中繁衍生息。佐治亚理工学院化学与生物化学学院的劳伦?威廉姆斯教授(Loren Williams)领导了本次对核糖体的研究。核糖体可谓是分子的初次“集结”，也是地球上的生命之源。今天的核糖体发挥着从RNA中将基因信息转化成细胞内蛋白质的作用。然而，早期的生命形式中是没有蛋白质的。因此，通过研究核糖体中不含有蛋白质的部分，科学家便能对远古时期细胞中的化学反应过程活得进一步的了解。他们使用了一种名叫“结构比较法”的技术，通过电脑建模，模拟了核糖体的演变过程。研究人员利用逆向工程，对远古时期的核糖体进行了“倒带回放” 。他们试图以此揭开生物起源的奥秘，解答“与我们在宇宙中的位置有关的存在主义问题”。此外，随着时间的推进，核糖体的附加片段也在不断增加。对这些附加片段的研究显示，核糖体中的“分子指纹”可以告诉我们这些片段被插入的时间，帮助研究人员更好地了解核糖体的演变过程。他们使用了一种名叫“结构比较法”的技术，通过电脑建模，模拟了核糖体的演变过程。此外，随着时间的推进，核糖体的附加片段也在不断增加。对这些附加片段的研究显示，核糖体中的“分子指纹”可以告诉我们这些片段被插入的时间，帮助研究人员更好地了解核糖体的演变过程威廉姆斯教授将这些“分子指纹”比作树干，随着树木的增长，树干外层会长出新的一圈组织，树干内部则始终保持不变。树干的核心部位记录着这棵树年轻时的信息，一圈圈年轮代表了这棵树走过的每一年岁月，最外面一层则记录着其当下的状态。就像树干的中心部分始终保持不变一样，所有现代核糖体的“核心部位”也都保留着38亿年前的样子。“我们正在研究，如何才能读取到这些极为古老的生物学记录，以期了解生物的起源，以及地球上生命的演变过程。”威廉姆斯教授说道。“核糖体本身就记录了自己的发展历史。随着时间的推进，它的体积变得越来越大，但就像树木的年轮一样，核糖体中最古老的部分也逐渐被封存了起来。”核糖体所记录的历史能够揭示生物在过去数十亿年间经历了怎样的变化。此外，它还能帮助我们了解生物诞生时地球上的环境条件，并帮助我们寻找外星生命。这对于NASA的天文生物学家来说具有十分重要的意义。他们一直在宇宙中搜寻其它可能演变出生命的星球。“核糖体的核心部位的形成时间比生物最初出现的时间还要古老，而我们至今仍然不是很了解核糖体的演变过程。”威廉姆斯教授说道。“核糖体是抗菌素的重点攻击对象之一，因此充分了解它的结构和生理特征对于我们来说具有非常重要的意义。”“这项研究让我们得以向前追溯到生命之树的起点——即所有现代细胞的共同祖先，那时候，蛋白质和氨基酸还不是地球上一切生命的基础。”“它帮助我们对地球上生命进化的最初阶段有了一些了解，还能为我们探索适合生命繁衍的地外环境提供指导。

血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)单克隆抗体 Monoclonal Antibody to Protein C Receptor, Endothelial (PROCR)FOR IN VITRO AND RESEARCH USE ONLY, NOT FOR USE IN CLINICAL DIAGNOSTIC PROCEDURES!Organism species    Homo sapiens (Human)    Product No.    HZ022Hu22    Clonality    Monoclonal    Host    Mouse    Immunoglobulin Type    IgG    Purification    Affinity Chromatography    Applications    WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA    Concentration    500ug/ml    UOM    200ug    Conjugate    No Conjugate    ANTIBODY SPECIFITYThe antibody is a mouse monoclonal antibody raised against PROCR. It has been selected for its ability to recognize PROCR in immunohistochemical staining and western blotting.APPLICATIONSWestern blotting: 1:100-400Immunocytochemistry in formalin fixed cells: 1:100-500Immunohistochemistry in formalin fixed frozen section: 1:100-500Immunohistochemistry in paraffin section: 1:50-200Enzyme-linked Immunosorbent Assay: 1:100-200Optimal working dilutions must be determined by end user.CONTENTSForm & Buffer: Supplied as solution form in PBS, pH7.4,containing 0.02% NaN3, 50% glycerol.IHC ImagesSTORAGEStore at 4oC for frequent use. Stored at -20oC to -80oC in a manual defrost freezer for one year without detectable loss of activity. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

白介素8受体α(IL8Rα)单克隆抗体 Monoclonal Antibody to Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra)FOR IN VITRO AND RESEARCH USE ONLY, NOT FOR USE IN CLINICAL DIAGNOSTIC PROCEDURES!Organism species    Homo sapiens (Human)    Product No.   HZ019Hu22    Clonality    Monoclonal    Host    Mouse    Immunoglobulin Type    IgG    Purification    Affinity Chromatography    Applications    WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA    Concentration    500ug/ml    UOM    200ug    Conjugate    No Conjugate    ANTIBODY SPECIFITYThe antibody is a mouse monoclonal antibody raised against IL8Ra. It has been selected for its ability to recognize IL8Ra in immunohistochemical staining and western blotting.APPLICATIONSWestern blotting: 1:100-400Immunocytochemistry in formalin fixed cells: 1:100-500Immunohistochemistry in formalin fixed frozen section: 1:100-500Immunohistochemistry in paraffin section: 1:50-200Enzyme-linked Immunosorbent Assay: 1:100-200Optimal working dilutions must be determined by end user.CONTENTSForm & Buffer: Supplied as solution form in PBS, pH7.4,containing 0.02% NaN3, 50% glycerol.IHC ImagesSTORAGEStore at 4oC for frequent use. Stored at -20oC to -80oC in a manual defrost freezer for one year without detectable loss of activity. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

为什么猫的寿命比狗的长？Jeanne Calment女士是世界上已知寿命最长的人类，她于1875年出生，1997年去世，长达122岁高龄。对于平均年龄只有71岁的人类来说，她已经是十分了不起了。不过更为神奇的是，来自美国德州的一只名叫Creme Puff宠物猫活了38岁，相比同类来说寿命长了一倍；另外一只名叫Bluey的澳洲牧羊犬活了29岁，当时成为了世界上已知的寿命最长的犬类，比一般的宠物狗寿命也要长将近一倍。几个世纪以来，科学家们都试图解决人类寿命的奥秘。究竟是什么决定了人们寿命的上限，我们又可以做哪些事情来延缓时钟的前进？如今，他们对宠物的寿命也产生了相同的兴趣。然而与人类一样，宠物寿命的奥秘也难以解释。不过，对此还是有一些有意思的假说能够解释为什么体型较小的狗寿命长于大型犬，以及猫的寿命为什么比狗的还要长。 解决动物的寿命是一个"十分有趣的问题"，华盛顿大学的进化遗传学家Daniel Promislow说到。"它囊括了行为、生殖、生态、进化等诸多方面。如果我们能够掌握如何提高生命长度与丰度的秘诀，那对于我们的宠物以及我们自己来说都是一件好事"。 其实，两千多年以来人们都在不断地寻找这个问题的答案。亚里士多德曾写过："动物寿命的长短的奥秘值得我们去探索"这一句话。他老人家认为水分是很重要的因素：大象寿命之所以长过老鼠，是因为庞大的躯体能够储存大量的水分，避免快速干枯。虽然"水分"说站不住脚，但他的论点内在的一个基础假说，即体型大的动物往往寿命较长却是至今以来科学家们唯一比较统一的观点。 "其它的假说都得不到全面的支持"，来自阿拉巴马大学的生物学家Steven Austad说到。过去一百年来最有名的猜想之一是：新陈代谢速率快的物种寿命往往较短，原因在于它们会快速地终止生理时钟的运行。然而，这一观点并不牢靠。鹦鹉每分钟心脏跳动雌鼠次数达到了600次，但它们的寿命却比很多心率不如它们的物种还要长很多年。另外，还有假说认为寿命短的动物体内会产生较多的对组织有害的自由基，或者细胞会提前停止分裂，但这一假说也缺乏证据支持。 Austad是一位对动物有一定程度了解的科学家。他从1970年就从事训狮的工作，知道一次意外导致腿部受伤，他才开始转向对生物的研究。1980年代中期，他作为博士后在委内瑞拉从事负鼠目动物行为的观测研究，当时他发现了这些动物衰老的速率很惊人。"从生长成熟到患白内障与肌肉消解只有不到3个月时间"，另外，他发现在一个没有天敌的孤岛上，同样的负鼠目动物衰老的速度就很慢，而且寿命也较长。 这一发现也侧面佐证了亚里士多德的论断。大型的动物因为天敌较少，所以寿命会较长。这并不是简单的生存问题，而是数百万年以来进化压力推动的结果。鲸鱼与大象之所以有充足的时间是因为没有其它物种会对攻击它们有想法。这也意味着这些动物能够充分摄取养分进行生长并繁育更多的后代。而体型较小的物种就不得不尽快性成熟并交配繁殖，而不会把资源花费在建立牢固的免疫系统上。 而对于宠物来说，"体型"说就显得很勉强了。猫体型比狗小但寿命却比狗长3年，同样，小狗的寿命是大狗的两倍左右。 但Austad的理论却依然可以适用。狗的祖先，灰狼，野生条件下寿命为11-12年。夜猫的寿命为16年。则说明这两个物种面对的进化压力是不同的。相对于猫来说，狗属于群居性动物，因此更容易传播感染病。而夜猫则更喜欢独来独往，因此疾病的传播速率就会低得多。同时，野猫的防卫机制更为全面，就像全身长满刺的豪猪一样，因此受到天敌威胁的概率也相应较低。与此相似，同样善于保护自己的鼹鼠与蝙蝠寿命也都高达30年与40年。 至于为什么体型小的狗寿命长于体型大的狗，解释起来就稍微复杂一点。像爱尔兰猎狼犬（70公斤左右）的最佳寿命为7年，而蝴蝶犬（4公斤）寿命在10年以上。许多狗品系出现至今也仅仅几百年的历史，所以说不上有什么进化压力。而实际上可能是I型类荷尔蒙生长因子（参与狗的体型发育）从中起到了一定的作用。研究者们已经发现这一蛋白对许多物种寿命的影响，但其中的机制仍不清楚。另外，大型犬相比小型犬会有很多健康问题，比如德国牧羊犬常常会有骨盆发育不良问题，而西伯利亚地区的爱斯基摩长毛犬则会有自身免疫疾病。 尽管有以上差别，如今的宠物相比以前都有了绝对寿命的提高。在过去40年间，狗的寿命延长了一倍，家猫的寿命与野猫相比也延长了一倍。其中最重要的原因是医疗条件的进步与饮食的合理化。

小鼠白蛋白(ALB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T20μg/L -500μg/L 使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白蛋白(ALB)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白蛋白(ALB)水平。用纯化的小鼠白蛋白(ALB)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白蛋白(ALB)，再与HRP标记的白蛋白(ALB)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白蛋白(ALB)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白蛋白(ALB)浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（960μg/L）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。480μg/L   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   240μg/L   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   120μg/L   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   60μg/L   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   30μg/L   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：  计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

人超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T2.5 U/mL - 80 U/mL 使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血液，组织样本中超氧化物歧化酶（SOD）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人超氧化物歧化酶（SOD）水平。用纯化的人超氧化物歧化酶（SOD）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入超氧化物歧化酶（SOD），再与HRP标记的超氧化物歧化酶（SOD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的超氧化物歧化酶（SOD）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人超氧化物歧化酶（SOD）浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（160 U/mL）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。80U/mL   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   40U/mL   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   20 U/mL   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   10 U/mL   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   5 U/mL   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：  计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

纸上DNA诊断，准确度媲美PCRDNA分析对于许多疾病的诊断和监控十分重要，最常见最可信的DNA测试方法是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR），它特异性强、灵敏度高、操作简便省时，但也还是需要在实验室中使用专门设备进行。如果有更方便、廉价的方法可以进行DNA分析，那么降低患者负担、提高某些疾病的早期筛查比例这些目标就更加容易实现。最近，加拿大多伦多大学的David Sinton等人利用纸质设备，通过一个外加电场，使用离子浓差极化法（ion concentration polarization，ICP）完成对DNA的直接分析。该研究发表于《J. Am. Chem. Soc.》。 离子浓差极化法由Sinton在去年发明（Anal. Chem., 2014, DOI:10.1021/ac502597v），可以控制带电分子在湿纸上的运动。现在，他的研究小组将这一方法用于操纵DNA的流动方向。首先，他们在纸上打印蜡从而划分出一个储液池以及一条长而细的通道。在储液池的边缘，他们在小区域内的纸上涂覆带正电荷的Nafion聚合物。然后，将染料标记的DNA注入到储液池中。通过对纸施加电场，使带负电的DNA聚集到涂有Nafion的区域。然后切换电场的极性，DNA顺着通道向下迁移，并根据分子量和电荷的不同而分离开。再对照标准DNA的结果，就可以知道待测DNA的种类。这有些类似DNA样品的凝胶电泳，但Sinton说，这个方法更简单也更便宜，试纸仅需花费几美分。Sinton等人随后进行了临床样本的测试。仅需十分钟，就能完成人类血清样本中乙肝病毒（HBV）DNA的预浓缩、分离、检测。而且，这一技术对HBV DNA的检测限仅为150 copies/mL，因而无需预先扩增病毒，足以用于乙型肝炎的早期诊断。该团队还利用该方法分析人类精液样品中的片段化DNA的比例，以评估精子的活力。这一方法得到结果与经典的精子染色质结构分析法（SCSA）结果一致。在所有病例中，这种纸基方法的结论与最后基于PCR的临床诊断结论都相同，临床诊断准确率达到100%。目前，该团队正计划设计一种便携式设备，为这种纸基技术提供合适的电压，并直接观察结果。

                    人乙肝（HBV）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T3.8pg/ml-200pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中乙肝（HBV）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乙肝（HBV）水平。用纯化的人乙肝（HBV）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙肝（HBV），再与HRP标记的乙肝（HBV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙肝（HBV）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人乙肝（HBV）浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（300pg/ml）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。150pg/ml   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   75pg/ml   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   37.5pg/ml   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   18.75pg/ml   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   9.375pg/ml   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结： 计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

                 人血清铁酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T6pg/ml –200pg/ml 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血清铁含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血清铁水平。用纯化的人血清铁抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血清铁，再与HRP标记的血清铁抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血清铁呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血清铁浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（400pg/ml）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。200pg/ml   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   100pg/ml   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   50pg/ml   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   25pg/ml   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   12.5pg/ml   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结： 计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

新型工具帮助科学家深入观测大脑生物电活性来自斯坦福大学的科学家们近日宣告称，他们开发了一种新型工具，其或许可以帮助深入理解生命体中神经元的活动，文章中研究人员揭示了该工具工作的原理，而且他们认为利用该工具或对于后期研究将带来巨大帮助。为了更好理解大脑的工作机制，科学家们在理想状况下实时观看了神经元如何发射信号以及这些电信号如何通过神经元网络来同其他神经元相互作用；本文研究提供了一种特殊工具，科学家们就可以利用该工具来清楚地观察有机体中的大脑活性，同时在清醒的小鼠和果蝇机体中观测神经元“放出火花”，而这或将是一种新型的遗传编码电压指示器。本文中研究者开发的新型工具是早期神经元薄膜电压指示器的改进形式，因为该工具非常快速，为了制造这种工具，研究人员将一种用于细胞薄膜且对电压及其敏感的分子同可以发射荧光的蛋白相互融合，随后利用一种病毒来运输分子至神经元；这种新型工具可以通过“回放”在显微镜下的神经元电活性发射来发挥作用，研究者在文章中说道，该工具可以低于1毫秒的情况下显现神经元的活性，而且还可以将错误的阅读率几乎降低到0。最后研究者指出，新型研究工具的开发将帮助研究人员在活体动物中观察大脑的活性变化，从而为揭秘并且实时观察神经元特性及活性变化提供一定的思路和依据。

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-16抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-16会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-16抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-16抗体与结合在包被抗体上的人IL-16结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-16浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-16的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-16，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-15抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-15会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-15抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-15抗体与结合在包被抗体上的人IL-15结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-15浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-15的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为1000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制500pg/mL标准品：取0.5mL1000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  1000 500 250 125 62.5 31.25 15.625 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 9.375pg/mL。 ●检测范围：15.625–1000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-15，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-32抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-32会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-32抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-32抗体与结合在包被抗体上的人IL-32结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-32浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-32的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为1000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制500pg/mL标准品：取0.5mL1000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。   4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  1000 500 250 125 62.5 31.25 15.625 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情 况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 9.375pg/mL。 ●检测范围：15.625–1000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-32，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

人白介素15(IL-15)酶联免疫吸附测定试剂盒结果判断特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-15抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-15会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-15抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-15抗体与结合在包被抗体上的人IL-15结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-15浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-15的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。 试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为1000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制500pg/mL标准品：取0.5mL1000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  1000 500 250 125 62.5 31.25 15.625 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情 况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 9.375pg/mL。 ●检测范围：15.625–1000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-15，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

人白介素32(IL-32)酶联免疫吸附测定试剂盒结果判断特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-32抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-32会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-32抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-32抗体与结合在包被抗体上的人IL-32结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-32浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-32的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。 试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为1000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制500pg/mL标准品：取0.5mL1000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  1000 500 250 125 62.5 31.25 15.625 0 pg/mL 洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 9.375pg/mL。 ●检测范围：15.625–1000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-32，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

人白介素6受体(IL-6R)酶联免疫吸附测定试剂盒结果判断特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-6R抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-6R会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-6R抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-6R抗体与结合在包被抗体上的人IL-6R结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-6R浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-6R的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-6R，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

人髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)酶联免疫吸附测定试剂盒操作方法特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人MOG抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人MOG会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人MOG抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人MOG抗体与结合在包被抗体上的人MOG结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，MOG浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中MOG的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为10ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0.156 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.094ng/mL。 ●检测范围：0.156–10ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 MOG，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

人骨涎蛋白(BSP)酶联免疫吸附测定试剂盒操作方法特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人BSP抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人BSP会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人BSP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人BSP抗体与结合在包被抗体上的人BSP结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BSP浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BSP的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为40ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制20ng/mL标准品：取0.5mL40ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。   4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  40 20 10 5 2.5 1.25 0.625 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.375ng/mL。 ●检测范围：0.625–40ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 BSP，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human BMPR-II ELISA Kit使用说明书特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人BMPR2抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人BMPR2会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人BMPR2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人BMPR2抗体与结合在包被抗体上的人BMPR2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BMPR2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BMPR2的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为10ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0.156 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.094ng/mL。 ●检测范围：0.156–10ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 BMPR2，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

Human Arg ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  Human Arg ELISA Kit检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人ARG1抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ARG1会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ARG1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人ARG1抗体与结合在包被抗体上的人ARG1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ARG1浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中ARG1的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4.Human Arg ELISA Kit 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为200ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制100ng/mL标准品：取0.5mL200ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 Human Arg ELISA Kit标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管） 

Human AR ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人AR抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人AR会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人AR抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人AR抗体与结合在包被抗体上的人AR结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，AR浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中AR的浓度。 Human AR ELISA Kit样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human AR ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为20ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制10ng/mL标准品：取0.5mL20ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配Human AR ELISA Kit制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管） 

Human AQP-4ELISA KitNote: *: [96T/48T] #: It’s OK to keep the kit in 4℃, if the kit is scheduled to be used up in one week. Please keep the reagent in -20℃ for long-term storage or repeated use. The reagent in each vial is slightly more that its volume written on label, please take out the required volume by certain tools (such as transferpettor, measuring cylinder), rather than pouring directly.  Test principle This ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to Human AQP-4. Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for Human AQP-4 and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain Human AQP-4, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The OD value is  proportional to the concentration of Human AQP-4. You can calculate the concentration of AQP-4 in the samples by comparing the OD of the samples to the standard curve.  Human AQP-4ELISA KitSample collection and storage Serum - Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°Cbefore centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin.  Plasma - Collect plasma using EDTA-Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples.  Human AQP-4ELISA KitTissue homogenates– For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces. Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate.  Cell culture supernate – Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately.  Human AQP-4ELISA KitOther biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing Sample preparation – Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids. Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor).  Other supplies required   Microplate reader with 450nm wavelength filter High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips 37°C Incubator, Deionized or distilled water Absorbent paper  Human AQP-4ELISA KitReagent preparation Bring all reagents to room temperature before use. Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°Cwater bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard- Centrifuge at 10,000×g for 1 minute, and reconstitute the Standard with 1.0mL of Reference Standard &Sample Diluent. Tighten the lid, let it stand for 10 minutes and turn it upside down for several times. After it dissolves fully, mix it thoroughly with a pipette. This reconstitution produces a stock solution of 20ng/mL. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows:20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0ng/mL . As if you want to make standard solution at the concentration of 10ng/mL, you can take 0.5mL the standard at 20ng/mL, add it to an EP tube with 0.5mL Reference Standard &Sample Diluent, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (20ng/mL). The Reference Standard &Sample Diluent serves as the zero (0ng/mL). (500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube)

Human ADAM10 (A Disintegrin And Metalloprotease 10) ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人ADAM10抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ADAM10会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ADAM10抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人ADAM10抗体与结合在包被抗体上的人ADAM10结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ADAM10浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中ADAM10的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human ADAM10 (A Disintegrin And Metalloprotease 10) ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为4000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制2000pg/mL标准品：取0.5mL4000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  4000 2000 1000 500 250 125 62.5 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 Human ADAM10 (A Disintegrin And Metalloprotease 10) ELISA Kit 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！  结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 37.5pg/mL。 ●检测范围：62.5–4000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 ADAM10，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 Human ADAM10 (A Disintegrin And Metalloprotease 10) ELISA Kit操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human IL-20 (Interleukin 20) ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-20抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-20会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-20抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-20抗体与结合在包被抗体上的人IL-20结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-20浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-20的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human IL-20 (Interleukin 20) ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为4000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制2000pg/mL标准品：取0.5mL4000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  4000 2000 1000 500 250 125 62.5 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 Human IL-20 (Interleukin 20) ELISA Kit 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  Human IL-20 (Interleukin 20) ELISA Kit灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 37.5pg/mL。 ●检测范围：62.5–4000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-20，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human ACTG1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人ACTG1抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ACTG1会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ACTG1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人ACTG1抗体与结合在包被抗体上的人ACTG1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ACTG1浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中ACTG1的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human ACTG1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。   4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL  Human ACTG1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  Human ACTG1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 ACTG1，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算